Zaviranje endogenih inhibitorjev ß-katenina z načrtovanimi kratkimi protismiselnimi oligonukleotidiTerzić, Sanja (Avtor) Jerala, Roman (Mentor) sindrom CTNNB1beta-katenindestrukcijski kompleksaksin-1protismiselni oligonukleotidiProtein β-katenin, ki ga kodira gen CTNNB1, sodeluje v signalni poti Wnt in ima pomembno vlogo v zgodnjem nevrološkem razvoju. Pomanjkanje ß-katenina povzroča redek sindrom CTNNB1, za katerega so značilne motnje v kognitivnem in motoričnem razvoju. V magistrski nalogi smo želeli povečati količino citosolnega ß-katenina z zaviranjem delovanja aksina, ki je vpleten v razgradnjo β-katenina s pomočjo destrukcijskega kompleksa. V ta namen smo uporabili protismiselne oligonukleotide (angl. antisense oligonucleotides, ASOs), ki ciljajo vezavna mesta spajalno-izrezovalnega kompleksa na RNA za aksin. Pripravili smo delecijske konstrukte aksina brez izbranih eksonov ter s prenosom western, konfokalno mikroskopijo in pretočno citometrijo preverili njihovo izražanje, ko-lokalizacijo z ß-kateninom ter vpliv na aktivnost ß-katenina v celicah HEK293T. Na podlagi rezultatov smo načrtovali kratke protismiselne oligonukleotide ter testirali, ali lahko sprožijo preskakovanje eksonov na nivoju RNA ter kakšen je njihov vpliv na raven endogenega aksina in ß-katenina v celicah HEK293T. Protismiselni oligonukleotidi so povzročili preskakovanje tarčnih eksonov, znižali raven endogenega aksina ter povišali raven β-katenina v celicah. Po uporabi ASO:eks5 smo potrdili prisotnost dveh različic endogenega aksina. Dobljeni rezultati kažejo na možnost razvoja terapije za zdravljenje sindroma CTNNB1 na osnovi protismiselne tehnologije.20242024-03-31 07:15:08Magistrsko delo/naloga155421sl