Optimizacija postopka za gojitev krvnih celic repatih dvoživk in vitroForte Berlec, Viktoria (Avtor) Bizjak Mali, Lilijana (Mentor) Gredar, Tajda (Komentor) Proteus anguinusPleurodeles waltlkrvne celicecitogenetikaGojenje krvnih celic je pomemben nedestruktiven pristop pridobivanja mitotičnega materiala (tj. metafaznih kromosomov), ki se ga uporabi za študije citogenetike in evolucije. Zaradi nezadovoljivega števila metafaznih kromosomov v predhodnih poskusih in vitro na krvi močerila (Proteus anguinus), smo metodo v tej raziskavi dodatno optimizirali in vpeljali tudi gojenje krvnih celic modelne repate dvoživke (Pleurodeles waltl). Primarno celično kulturo smo vzpostavili iz frakcije levkocitov in polne krvi. S testom proliferacije z BrdU smo ugotovili, da je ustrezna dolžina inkubacije z mitogenom PHA-M, ki je potreben za proliferacijo limfocitov, 4-5 dni pri močerilu in manj kot 4 dni pri španskem pupku ter v koncentraciji 6 % (vol/vol). Ustrezna koncentracija antimitotika kolcemida je bila 3 in 8 μg/ml, dodanega v celično kulturo za 24 in 48 ur. Kot najbolj obetavni vzorci za gojenje in vitro so se izkazali krvni vzorci zaporednih odvzemov krvi pri isti živali v kratkem časovnem intervalu (od 7 do 21 dni), saj spodbudimo proliferacijo krvnih celic in vivo. Na ta način smo pri španskem pupku uspeli pridobiti visoko število setov metafaznih kromosomov (več sto na eno objektno steklo) in zadovoljivo število setov metafaznih kromosomov pri močerilu (do 10). Vseeno pa je potrebna nadaljnja optimizacija postopkov po zaključku gojitve celic in vitro, da bo zagotovljena tudi ustrezna razporeditev in morfologija kromosomov za citogenetske analize.[V. Forte Berlec]20242024-03-21 11:49:13Magistrsko delo/naloga155142sl