Spremljanje izražanja genov s fluorescenčnimi poročevalci v realnem času pri bakterijah Streptomyces spp.Fazarinc, Ika (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) Mrak, Peter (Komentor) neinvazivne analitske metodeporočevalski sistemklavulanska kislinaStreptomyces clavuligerusregulacija izražanja genovZaradi potrebe po neinvazivni metodi za spremljanje fluorescence v realnem času v rastočih bakterijskih kulturah smo skupaj s podjetjem PreSens razvili merilec mSDR. Inovativno orodje, ki omogoča sočasno spremljanje rdeče fluorescence v do 240 vzorcih. Orodje smo vzpostavili, kalibrirali, preverili zmogljivost in območje detekcije signala. Njegovo uporabno vrednost smo preverili na primeru bakterije Streptomyces clavuligerus in poročevalskega sistema za aktivnost regulatorja CcaR, pozitivnega regulatorja gruče genov za biosintezo klavulanske kisline. Poročevalski sistem je temeljil na promotorju PceaS2, ki je vezavno mesto aktivatorja in promotorska regija prvega gena v gruči za biosintezo klavulanske kisline, in poročevalskem proteinu mCherry. Sklepali smo, da bo povečana aktivnost regulatorja CcaR vodila v močnejšo transkripcijo tako poročevalskega gena kot genov gruče klavulanske kisline. S pomočjo poročevalskega sistema in orodja mSDR smo natančneje spoznali mehanizme regulacije CcaR in izražanja genov za biosintezo klavulanske kisline. Ugotovili smo, da lahko na podlagi spremljanja fluorescence prepoznamo seve z boljšo produktivnostjo in večjim izkoristkom. Odkrili smo nove potencialne pristope za izboljšanje produkcijskih sevov in izrazito izboljšali produktivnost izbranega seva. Zasnovano orodje se je izkazalo kot izredno uporabno za spremljanje aktivnosti in regulacije izražanja genov vključenih v sintezo pomembnih sekundarnih metabolitov ter za izbor potencialnih sevov na laboratorijskem nivoju. Še več, orodje ima potencial za uporabo za različne analitske namene v mikrobiologiji in širše.[I. Fazarinc]20232023-12-06 10:32:21Magistrsko delo/naloga152758sl