Izražanje in izolacija proteina fenilalanin-tRNA sintetazeRapuš, Špela (Avtor) Rogelj, Boris (Mentor) ALSFTDFARSc9orf72izražanje proteinovRazširitvena mutacija G4C2 na genu c9orf72 po več znanih mehanizmih vpliva na razvoj nevrodegenerativnih bolezni kot sta ALS in FTD. Eden izmed njih je tudi pridobitev toksičnih lastnosti zaradi smernih in protismernih prepisov RNA. V primeru vezave protismernega prepisa RNA na protein fenilalanin tRNA-sintetazo (FARS) pride do inhibicije aminoacilacije tRNAPhe, kar negativno vpliva na potek bolezni. Da bi bolje raziskali način vezave in interakcije protismernega prepisa RNA s proteinom FARS, smo protein izrazili v bakterijskem ekspresijskem sistemu in ga izolirali. Postopek izražanja smo optimizirali tako, da smo večino proteina dobili v topni frakciji za kar smo uporabili maltoza vezavni protein. Obe podenoti proteina FARS sta se najbolje izražali pri 18 ⁰C z dodanim fuzijskim maltoza vezavnim proteinom. Proteina smo izolirali z nikljevo afinitetno kromatografijo z uporabo heksahistidinske oznake na obeh rekombinantnih proteinih. V prihodnosti bi morali izvesti izražanje in izolacijo v večjem merilu, postopek izolacije pa bi bilo potrebno tudi optimizirati, saj je bil velik del rekombinantnih proteinov proteolitično razgrajen. Boljše poznavanje mehanizma bi lahko prispevalo k razvoju novih metod zdravljenja bolezni, povezanih s c9orf72.20232023-12-01 14:50:01Diplomsko delo/naloga152639sl