Spremljanje sprememb v aktivnosti tiopurin S-metiltransferaze in odmerjanju 6-merkaptopurina pri pacientih z akutno limfoblastno levkemijoTuškei, Kaja (Avtor) Šmid, Alenka (Mentor) Urbančič, Dunja (Komentor) tiopurin S-metiltransferaza (TPMT)akutna limfoblastna levkemija (ALL)6-merkaptopurin (6-MP)encimska aktivnosttekočinska kromatografija visoke ločljivostiTiopurini so pomembna skupina zdravilnih učinkovin, ki jih med drugim uporabljamo za zdravljenje akutne limfoblastne levkemije (ALL). V njihovem metabolizmu sodeluje veliko encimov, ki vodijo do nastanka aktivnih metabolitov, 6-tiogvanozinov. Deaktivacijska pot, pri kateri je ključen encim tiopurin S-metiltransferaza (TPMT), vodi do nastanka metiliranih produktov. Pri okoli 11 % posameznikov je aktivnost tega encima oslabljena, pri 0,3 % pa celo nezaznavna. Znižana aktivnost TPMT je posledica genetskih polimorfizmov posameznih nukleotidov, med katerimi so najpogostejši polimorfizmi alelov TPMT*3. Poznavanje aktivnosti TPMT je pri bolnikih, ki prejemajo zdravljenje s tiopurini, pomembno za določitev pravega odmerka, ki bo dosegel želen terapevtski izid, hkrati pa ne bo povzročil hudih neželenih učinkov. V sklopu magistrske naloge smo ovrednotili metodo za merjenje aktivnosti TPMT, pri čemer smo kot substrat uporabili 6-tiogvanin (6-TG). Zanimalo nas je, ali obstaja korelacija med rezultati nove metode (kjer nastaja 6-metiltiogvanin (6-MTG)) in že vzpostavljene metode, kjer kot substrat uporabljamo 6-merkaptopurin (6-MP). Preverili smo, kako se aktivnost TPMT razlikuje med skupinami posameznikov z različnimi genotipi TPMT. Pri bolnikih z ALL, ki so prejemali zdravljenje s tiopurini, smo ugotavljali, ali obstaja povezava med aktivnostjo TPMT in kumulativnimi odmerki tiopurinov, odmerki 6 MP, odmerki metotreksata (MTX), koncentracijo levkocitov in aktivnostmi jetrnih transaminaz. Z uporabo tekočinske kromatografije visoke ločljivosti z reverzno fazo smo izmerili aktivnost TPMT v 109 hemolizatih zdravih prostovoljcev iz Estonske genomske banke z uporabo 6-TG kot substrata. Encimsko aktivnost smo preko nastanka 6-MTG izmerili še v hemolizatih bolnikov z ALL. Aktivnost TPMT, izmerjena preko nastanka 6 MTG, korelira z aktivnostjo TPMT, izmerjeno preko nastanka 6 metilmerkaptopurina (6-MMP). Po razvrstitvi zdravih prostovoljcev iz Estonske genomske banke med heterozigote TPMT*3C oz. TPMT*3A in nevariantne homozigote smo ugotovili, da se aktivnost TPMT razlikuje med osebami z različnimi genotipi TPMT in je v skupini z variantnim alelom značilno nižja kot v skupini brez variantnega alela. Pri bolnikih z ALL nismo pokazali statistično značilne povezave med aktivnostjo TPMT ter kumulativnimi odmerki tiopurinov, odmerki 6-MP, odmerki MTX ali aktivnostjo jetrnih transaminaz. Med aktivnostjo TPMT in koncentracijo levkocitov je šibka, a statistično značilna povezava, za katero smatramo, da ni klinično pomembna. Naši rezultati potrjujejo, da je metoda za merjenje aktivnosti TPMT, kjer kot substrat uporabljamo 6-TG, hitra, občutljiva in primerna za rutinsko spremljanje aktivnosti TPMT. Pred uvedbo v rutinsko klinično prakso bo potrebno metodo še nekoliko optimizirati s ciljem izboljšati celokupno ponovljivost. Potrebna je še dodatna validacija metode.20232023-10-22 07:45:23Magistrsko delo/naloga151842sl