Vpliv prekomernega izražanja membranskih črpalk na produkcijo tetraciklinskih analogov pri bakteriji Streptomyces rimosusPeternel, Helena (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) Avbelj, Martina (Komentor) Streptomyces rimosusmembranske črpalkesekundarni metabolitioksitetraciklinanhidrotetraciklinotrBotrCNekatere bakterije so sposobne proizvodnje raznovrstnih sekundarnih metabolitov, vendar pa jih običajno proizvajajo v nizkih koncentracijah. Če želimo doseči višje titre, je ena izmed možnosti izboljšava proizvodnega seva s povečanjem odpornosti na sekundarni metabolit. To lahko dosežemo npr. s povečanim izražanjem membranskih črpalk. Namen naloge je bil vstaviti dodatne gene za membranski črpalki OtrB in OtrC v tri izbrane seve Streptomyces rimosus in na ta način doseči povečano izražanje izbrane membranske črpalke. V nalogi smo želeli ovrednotiti, kako povečano izražanje membranskih črpalk OtrB in OtrC nato vpliva na produkcijo TC analogov OTC in ATC. Po konstrukciji plazmidov z genom za membransko črpalko in konstitutivnim promotorjem smo plazmide z metodo konjugacije vstavili v tri različne seve S. rimosus. Po pridobitvi konjugant je sledila kultivacija v produkcijskem gojišču in primerjava titra tarčnih spojin konstruiranih sevov s kontrolnimi sevi. Ugotovili smo, da vnos membranskih črpalk OtrB in OtrC v divji sev S. rimosus ATCC 10970 in industrijski sev S. rimosus HP0508 ni vplival na povečan titer OTC v primerjavi s kontrolnimi sevi. Izjema so konjugante S. rimosus ATCC 10970::OtrC, pri katerih je vnos membranske črpalke OtrC vplival na 32 % povečanje OTC titra. Pri sevu S. rimosus BF_7S pa smo ugotovili, da povečano izražanje obeh omenjenih membranskih črpalk pripomore k znatnemu, do 18-kratnemu izboljšanju produkcije ATC.[H. Peternel]20232023-10-08 07:15:11Magistrsko delo/naloga151503sl