Modulacija ekspresije genov z uporabo protismernih oligonukleotidovZabret, Nika (Avtor) Jerala, Roman (Mentor) 5' regija UTRβ-kateninprotismerni oligonukleotiditranslacijaNa uravnavanje izražanja genov lahko vplivamo na nivoju transkripcije, zorenja primarnega transkripta pre-mRNA in translacije. V tem magistrskem delu predstavimo pristop uravnavanja izražanja genov z uporabo protismernih oligonukleotidov (ASO) na nivoju translacije. Načrtovali smo ASO, ki se tarčno vežejo na zaporedja v 5' regiji UTR, ki imajo zaradi oblikovanja sekundarnih struktur potencialno inhibitorne učinke na iniciacijo translacije. Vezava ASO lahko poruši elemente sekundarne strukture in olajša iniciacijo translacije in posledično poveča izražanje gena. Ta pristop smo preizkusili na genu CTNNB1, ki zapisuje protein β-katenin, ki ima v celici pomembno strukturno in signalizacijsko vlogo. Prisotnost mutacije v enem izmed alelov gena CTNNB1 zaradi zmanjšanega izražanja ali nefunkcionalnosti β-katenina vodi v razvoj sindroma CTNNB1, zato ima uporaba ASO za povišanje izražanja β-katenina potencial za terapevtske namene. Z uporabo TopFlash/FopFlash reporterskega sistema smo z merjenjem luminiscence pokazali, da s transfekcijo ASO v celice HEK293T dosežemo povečano aktivacijo signalne poti Wnt, v katero je vključen β-katenin. Po transfekciji ASO v celične linije HEK293T, SH-SY5Y in iPSC pa smo z imunodetekcijo proteinov na membrani pokazali, da pride ob dodatku tarčnih ASO do povišanja količine β-katenina v celicah vseh testiranih celičnih linij. Ker smo pokazali, da z uporabo načrtovanih ASO povečamo izražanje in obenem dosežemo povečano aktivnost β-katenina, bi bil tak pristop v kombinaciji z ustrezno dostavno metodo obetaven za klinično uporabo.20232023-09-30 07:15:49Magistrsko delo/naloga151121sl