Validacija analizne metode na osnovi tekočinske kromatografije, sklopljene s tandemsko masno spektrometrijo, za kvantifikacijo analitov v človeških jetrnih mikrosomihUrbanček, Alja (Avtor) Pajk, Stane (Mentor) Rozenski, Jef (Komentor) klindamicinmetabolizemLC-MS/MSvalidacijamikrosomske inkubacijeNamen magistrske naloge je razviti in potrditi analitično metodo z reverzno-fazno tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti (UHPLC), povezano s trojnim kvadrupolnim masnim spektrometrom (MS/MS), za kvantitativno bioanalizo klindamicina (CLI) in njegovih metabolitov, klindamicin sulfoksida (CSO) in N-demetil klindamicina (CDM). Postopek validacije je bil namenjen pridobitvi podatkov iz in vitro modelov za opazovanje metabolizma s humanimi jetrnimi mikrosomi (HLM), potrebnih za razvoj in silico fiziološko temelječega farmakokinetičnega (PBPK) modela za izboljšanje razumevanja klinične farmakologije CLI. Preiskovana učinkovina CLI spada v skupino linkozamidov, ki so razred antibiotikov, ključnih pri zdravljenju in preprečevanju bakterijskih okužb, saj preko vezave na ribosomsko ribonukleinsko kislino večje podenote bakterijskih ribosomov, zavirajo sintezo bakterijskih beljakovin. Kljub dolgoletni uporabi še vedno obstajajo vrzeli v razumevanju nekaterih vidikov povezanih s CLI, vključno z mehanizmi odpornosti, interakcija z drugimi zdravili in posledičnim optimalnim odmerjanjem ter dolgoročnimi učinki. Sklopljeni analizni tehniki UHPLC in MS/MS sta bila uporabljeni zaradi izboljšane učinkovitosti ločevanja, občutljivosti in zmožnosti kvantifikacije. Poleg prve, smo razvili še drugo LC-MS/MS metodo za vrednotenje midazolama (MDZ). Obe validirani metodi sta se izkazali za linearni s koeficientom determinacije (R2) nad 0,990. Čas ene kromatografske meritve je bil približno 6 minut, kar je omogočilo natančne, točne in zanesljive rezultate, ki izpolnjujejo kriterije validacije. Metoda prav tako izkazuje dobro selektivnost, občutljivost in ustrezne meje detekcije (LOD) in kvantifikacije (LOQ). Presnova CLI v HLM, ki posnemajo jetrno in vivo presnovo, je pokazala močno inverzno korelacijo med koncentracijo CLI in tvorbo CSO, kar potrjuje primarni metabolizem CLI prek S-oksidacije, katalizirane preko encimov iz družine citokromov P450 (CYP). Medtem ko v drugih vzorcih, metabolizma MDZ ni bilo opaziti, najverjetneje zaradi neaktivnih hepatocitov ali drugih dejavnikov priprave inkubacij. Validirani metodi LC-MS/MS sta se izkazali za uspešno analitično orodje pri kvantificiranju CLI in MDZ v in vitro modelih s HLM. Pridobljeni pričakovani rezultati dajejo dragocen vpogled v metabolizem CLI, kar bo z razvojem in silico modelov PBPK in terapevtskim spremljanjem zdravil v prihodnosti omogočilo nadaljnje klinične študije.20232023-09-13 08:45:12Magistrsko delo/naloga150039sl