Optimizacija encimskoimunskega testa na osnovi nanotelesa za določitev koncentracije virusnega proteina Nef v bioloških vzorcihŽvanut, Samuel (Avtor) Lenassi, Metka (Mentor) Nefencimskoimunski testnanotelo sdAb19Kljub nekaterim testom za detekcijo rezervoarjev virusa humane imunske pomanjkljivosti tipa 1 (HIV-1), sposobnih ponovne infekcije, manjkajo metode, ki bi ovrednotile obsežnost translacijsko sposobnih in posledično biološko aktivnih rezervoarjev HIV-1. Nef se dokazano sprošča iz rezervoarjev HIV-1 v telesne tekočine in ima funkcijo v patogenezi HIV-1. V nalogi smo optimizirali encimskoimunski test (ELISA) za detekcijo virusnega proteina Nef. ELISA smo izvedli na osnovi nanotelesa sdAb19 proti Nef, ki smo ga biotinilirali in vezali na nevtravidinsko podlago. V pufru smo uspeli detektirati rekombinantni Nef (rNef) pri meji ozadja 4,25 ng/ml in meji detekcije 6,79 ng/ml, kar sovpada s fiziološkimi koncentracijami Nef v plazmi okuženih. Razpon koncentracij, v katerem je ELISA na osnovi sdAb19 kvantitativna, je med 10 ng/ml in 400 ng/ml. Pri detekciji rNef, ki smo ga raztopili v človeškem serumu, smo opazili visoko mejo ozadja, detekcija rNef pa je bila neuspešna. Ob uspešni optimizaciji testa v kompleksnih bioloških tekočinah bi s pristopom, ki smo ga opisali v nalogi, lahko relativno učinkovito ovrednotili obsežnost aktivnih rezervoarjev, vpletenih v patogenezo HIV-1.[S. Žvanut]20232023-09-13 08:15:43Magistrsko delo/naloga150017sl