Tarčna integracija transgenih zapisov za CD19-CAR v genom limfocitov T z uporabo izboljšanega sistema CRISPR/Cas9Skrbinek, Mojca (Avtor) Lainšček, Duško (Mentor) CAR-TCRISPR/Cas9imunoterapija rakapreurejanje genomaTrenutne metode proizvodnje celic CAR-T z virusno transdukcijo imajo omejitve zaradi ne-tarčne integracije terapevtskih transgenov v genom in morebitne insercijske mutageneze. V magistrskem delu smo se osredotočili na ne-virusno genetsko modifikacijo celic CAR-T s tehnologijo CRISPR/Cas9 in njegovo izboljšano različico. Glavni cilj je izboljšati učinkovitost in varnost z naprednim sistemom preurejanja genoma, CCExo, ki omogoča tarčno vstavljanje zapisa za receptor CAR v genom limfocitov T. Oblikovali smo različno dolge HDRt z zapisom za transgen CD19-CAR in RCC za povečanje učinkovitosti HDR. Transgen smo vstavljali v dva specifična lokusa, TRAC in TRBC1, ki sta del T-celičnega receptorja. Rezultati kažejo, da je sistem CRISPR/Cas9 učinkovit pri vstavljanju transgena ne glede na dolžino homolognih zaporedij in prisotnost RCC. CCExo je pokazal povečano učinkovitost tarčnega funkcionalnega vstavljanja transgena CD19-CAR v genom limfocitov T v primerjavi s klasičnim sistemom CRISPR/Cas9, zlasti pri krajših HDRt ob prisotnosti RCC. TRBC1 tarčna integracija transgena je bila dodatno povečana pri elektroporaciji z ribonukleoproteini v primerjavi s plazmidno elektroporacijo. Uporaba tehnologije CRISPR/Cas9 in njegove izboljšane različice CCExo se izkazuje kot obetavna pot za izboljšanje priprave terapevtskih celic ter terapije s celicami CAR-T in razširitev njene uporabe pri zdravljenju raka.20232023-09-09 07:15:43Magistrsko delo/naloga149744sl