Izražanje in izolacija rastlinskih encimov PorA in CYP18-3Kolar, Alliana (Avtor) Taler-Verčič, Ajda (Mentor) jodiranjerastlinski proteiniPorACYP18-3molekulsko kloniranjePomanjkanje joda v človekovem organizmu povzroča številne zdravstvene težave. Med njimi je najpogostejša golša; pomanjkanje hkrati povezujemo tudi z motnjami v razvoju otroka in možnostjo spontanega splava med nosečnostjo. Najvišje količine joda se nahajajo v morski hrani, v naših kuhinjah pa ga največ najdemo v namizni soli. Kljub temu pa ga večina ljudi ne zaužije v zadostni količini. Rešitev za to bi lahko bila biofortifikacija, kjer bi v rastlinske pridelke vnesli dovolj visoke količine joda. Ker pa kopenskim rastlinam jod ne predstavlja tako pomembne vloge v njihovem organizmu, bi to lahko bil problem, ki ga je treba preštudirati. Encima PorA in CYP18-3 najdemo v rastlinah in oba igrata pomembno vlogo pri njenem razvoju – oba povezuje pomembna vloga v procesu fotomorfogeneze. V rastlini ju najdemo tudi v jodirani obliki (jod se veže na tirozine), ni pa znano, ali ima jodiranje kakšen vpliv na njuno funkcijo. Da bi ugotovili, ali se aktivnost obeh encimov spremeni po jodiranju, smo ju želeli pripraviti kot rekombinantna proteina. Z molekulskim kloniranjem smo uspeli pripraviti le zapis za protein CYP18-3 in ga vstaviti v vektor pET-32a(+). Zapisu smo dodali N-končno heksahistidinsko oznako ter prepoznavno mesto za proteazo TEV. Ob tem smo uporabili bakterijski klonirni sistem E. coli DH5α. Proteina nato nismo uspeli pripraviti v izbranem bakterijskem ekspresijskem sistemu E. coli BL21[DE3] pLysS. Iz naših rezultatov ni razvidno ali sploh prode do ekspresije proteina, ali pa pride do razgradnje. Postopek bo potrebno še optimizirati.20232023-09-08 11:40:00Diplomsko delo/naloga149701sl