Molekulsko kloniranje in priprava proteina parapeg HNRNPK v bakteriji Escherichia coliRazboršek, Klara (Avtor) Rogelj, Boris (Mentor) parapegeHNRNPKALSmolekulsko kloniranjeizražanje proteinovParapege so nemembranski organeli, ki se nahajajo znotraj jedra. Sestavljene so iz dolge nekodirajoče RNA (lncRNA) in različnih RNA-vezavnih proteinov, kot sta izrezovalni faktor bogat s prolini in glutamini (SFPQ) in protein brez domene POU, ki se veže na oktamer (NONO). Osrednji del tvori lncRNA NEAT1 (jedrni prepis 1 združka parapege). Heterogeni jedrni ribonukleoprotein K (hnRNPK) je RNA-vezavni protein, ki se nahaja v jedru in je eden ključnih proteinov pri nastanku parapeg. Povečana prisotnost teh jedrnih organelov v nevronih je značilna za amiotrofično lateralno sklerozo (ALS). Vloga in nastanek parapeg v povezavi z ALS še ni poznana. Za študij parapeg v povezavi z ALS smo se v sklopu diplomskega dela osredotočili na pripravo proteina parapeg hnRNPK. V ta namen smo s sestavljanjanjem po Gibsonu zapisa za HNRNPK in HNRNPK-NeonGreen vstavili v bakterijski ekspresijski vektor pMCSG7. Oba konstrukta HNRNPK smo uspešno poskusno izrazili v bakterijskih celicah E. coli BL21[DE3]. Določili smo optimalne pogoje za izražanje, ki se bodo uporabili pri obsežnejši proizvodnji proteina HNRNPK. Za nadaljnje raziskave je potrebno proces izražanja izvesti v večjem obsegu in izvesti še postopke čiščenja posameznih proteinov.20232023-09-05 10:10:00Diplomsko delo/naloga149186sl