Priprava rekombinantnega človeškega ß-katenina v fuziji s fluorescenčnimi proteini na N- in C-koncuJerina, Rebeka (Avtor) Gaber, Aljaž (Mentor) ß-kateninmCherrysfGFPrak debelega črevesa in dankesignalna pot WntRak debelega črevesa in danke (RDCD) je ena izmed najpogostejših in najsmrtonosnejših bolezni na svetu, za katero še vedno ne poznamo učinkovitega zdravljenja. Pogost vzrok za bolezen so mutacije v genu za APC, ogrodnem proteinu ß-katenin uničevalnega kompleksa, ki je pomemben člen signalne poti Wnt. Slednja regulira znotrajcelični nivo ß-katenina, ki ob aktivaciji signalne poti Wnt deluje kot transkripcijski koaktivator genov Wnt v jedu. Pravilno delovanje ß-katenin uničevalnega kompleksa, ki z razgradnjo citoplazemskega ß-katenina vzdržuje ustrezen nivo omenjenega transkripcijskega aktivatorja, je ključno za pravilno proliferacijo celic, nepravilnosti katere vodijo v razvoj različnih rakavih obolenj. Da bi bolje razumeli delovanje uničevalnega kompleksa, je potrebna karakterizacija v kompleksu sodelujočih proteinov. V ta namen smo želeli pripraviti in izolirati rekombinantni človeški ß-katenin v fuziji s fluorescenčnima proteinoma na N- in C- koncu, kar bi nam omogočilo nadaljnje študije njegove vloge v delovanju kompleksa in napredovanju raka. Zaradi nagnjenosti proteina k cepitvi tekom izražanja, smo se njegove priprave lotili po postopku, ki je bil optimiziran za pripravo ß-katenina brez fuzij. Prav tako smo za lažjo izolacijo necepljenih produktov protein izražali v dvojni fuziji. To se je izkazalo za učinkovito, saj nam je željeni ß-katenin v fuziji s fluorescenčnima proteinoma sfGFP in mCherry uspelo izraziti in izolirati. Za potrditev učinkovitosti postopka bi morali izvesti še dodatne kvantitativne analize. Pred uporabo pripravljenega ß-katenina za nadaljnje raziskave pa bi bilo potrebno protein do konca očistiti in skoncentrirati.20232023-09-04 09:45:01Diplomsko delo/naloga149123sl