Vpliv dveh načinov zamrzovanja na viabilnost in fragmentacijo DNA humanega semenaPungert, Tjaša (Avtor) Kunej, Tanja (Mentor) Štimpfel, Martin (Komentor) humano semepočasno zamrzovanjevitrifikacijaviabilnostfragmentacija DNANamen naše raziskave je bilo preveriti, kako dva načina zamrzovanja humanega semena vplivata na viabilnost in fragmentacijo DNA semenčic. V raziskavi je sodelovalo 69 moških prostovoljcev s koncentracijo semenčic vsaj 15*106/mL ter skupno gibljivostjo nad 40 %. Vsak vzorec humanega semena smo delili na tri volumsko enake alikvote, pri čemer smo en alikvot ocenili kot nativno seme, en alikvot smo zamrznili po protokolu počasnega zamrzovanja humanega semena, ki se uporablja na Ginekološki kliniki Univerzitetnega kliničnega centra Ljubljana, en alikvot humanega semena pa smo vitrificirali. Nativnemu vzorcu humanega semena ter odmrznjenim vzorcem po krioperzervaciji smo ocenili gibljivost, živost, zrelost ter fragmentacijo DNA. Zrelost smo določali na dva načina in sicer zrelost jedrnih beljakovin preko barvanja z anilin modrim ter zrelost semenčic preko vezave semenčic na hialuron. Za ocenjevanje DNA poškodb smo uporabili pretočno citometrijo. Naši rezultati kažejo, da zamrzovanje humanega semena zmanjša preživelost in gibljivost semenčic ter poveča fragmentacijo DNA. V zrelosti semenčic med nativnimi vzorci ter vzorci po krioperzervaciji nismo opazili razlik. Vitrifikacija v naši raziskavi ni imela statistično značilno boljšega vpliva na preživelost, gibljivost ali ohranjenost DNA po odmrzovanju humanega semena kakor počasno zamrzovanje. Slabši rezultati vitalnosti in povišana raven poškodb DNA po zamrzovanju humanega semena so skladni z našimi pričakovanji, nismo pa pričakovali tako primerljivih rezultatov med vzorci po počasnem zamrzovanju in vzorci po vitrfikiaciji. Nekatere druge raziskave na področju in uveljavljenost vitrifikacije v kliničnem okolju za zamrzovanje jajčnih celic in zarodkov nakazujejo, da bi drugačni pristopi vitrifikacije v prihodnosti lahko omogočili njeno uveljavitev v kliničnem okolju tudi za zamrzovanje humanega semena.20232023-08-26 07:15:32Magistrsko delo/naloga148533sl