Vpliv uravnavanja avtofagije na aktivnost katepsinov S in X v celicah mikroglijeBrilej, Žana (Avtor) Pišlar, Anja (Mentor) mikroglijakatepsin Skatepsin XavtofagijaCelice mikroglije so rezidenčne imunske celice centralnega živčnega sistema (CŽS), katerih glavna naloga je vzdrževanje homeostaze in imunska zaščita možganov. Aktivirajo se kot odziv na številne dražljaje, pri čemer se lahko polarizirajo v dva različna fenotipa: klasičen M1 fenotip, za katerega je značilno spodbujanje vnetja, in alternativni M2 fenotip, ki deluje zaščitno. M1 polarizirana mikroglija poleg vnetnih dejavnikov in citokinov izloča povečano količino lizosomskih peptidaz, med katere uvršamo tudi cisteinske katepsine. Slednji so povezani s številnimi patološkimi procesi, med drugim tudi nevrodegeneracijo, zato je uravnavanje njihovega delovanja zelo pomembno. V okviru diplomske naloge smo želeli ovrednotiti vpliv uravnavanja avtofagije na aktivnost cisteinskih katepsinov v celicah aktivirane mikroglije, pri čemer smo se osredotočili na katepsina S in X. Postavili smo celični model aktivirane mikroglije s pomočjo celične linije BV2. Najprej smo pokazali, da TNF-a in LPS aktivirata celice BV2, pri čemer LPS povzroči učinkovitejšo polarizacijo v M1 fentoip, kar smo potrdili z merjenjem količine izločenega NO. Nadalje smo pokazali, da stimulacija celic BV2 s TNF-a poveča aktivnost katepsina X v celičnih lizatih, medtem ko na aktivnost katepsina S nima značilnega vpliva. V nasprotju, LPS nekoliko zmanjša znotrajcelično aktivnost obeh katepsinov. V nadaljevanju smo celice BV2 predtretirali z modulatorji avtofagije in ponovno opazovali spremembo morfologije celic, vrednotili polarizacijo ter znotrajcelično aktivnost katepsina S in X. Spodbujanje procesa avtofagije je povzročilo rahlo znižanje izločanja NO v aktivirani migrogliji, kar nakazuje na zmanjšano polarizacijo v M1 fenotip, medtem ko zaviranje avtofagije ni imelo znatnega vpliva na polarizacijo mikroglije. Celice BV2, ki smo jih predtretirali z induktorji avtofagije, so izkazovale povečane znotrajcelične aktivnosi katepsinov S in X, kar smo pokazali z merjenjem encimske kinetike v celičnih lizatih. Zaviranje avtofagije pa je povzročilo zmanjšane aktivnosti cisteinskih katepsinov v stimuliranih celicah BV2, kar je lahko posledica povečanega izločanja iz celice. Rezultati kažejo, da aktivacija avtofagije zmanjšuje polarizacijo mikroglije v vnetni fenotip in vpliva na delovanje katepsinov S in X. Uravnavanje avtofagije tako predstavlja potencialno terapevtsko tarčo za zdravljenje in preprečevanje nevrodegenerativnih motenj, povezanih z nevrovnetjem.20232023-08-23 07:45:18Diplomsko delo/naloga148428sl