Razvoj analitskih kromatografskih metod za spremljanje procesa proizvodnje lentivirusnega vektorjaSkvarča, Vid (Avtor) Ravnikar, Maja (Mentor) Peljhan, Sebastijan (Komentor) biotehnologijaprocesna analitikalentivirusproces čiščenjaPosledica vzpona genske terapije je povečana potreba po lentivirusnih vektorjih. Nov razred kompleksnih bioloških zdravil je proizvajalce postavil pred številne razvojne in proizvodne izzive. Med najbolj perečimi je vzpostavitev ponovljive proizvodnje, ki bi zagotavljala varnost in učinkovitost končnega izdelka. Kot pomemben del rešitve so bile v okviru FDA pobude procesno analitskih tehnologij prepoznane enostavne in hitre analitske tehnike. Za boljše razumevanje in vzpostavitev celovitejšega nadzora smo za proizvodnjo letnivirusnega vektorja razvili metodo kromatografskih prstnih odtisov. Namen je bil vzpostaviti metodo, ki bi proizvodni proces spremljala od vstopnih surovin za bioproces preko korakov čiščenja vse do kontrole kakovosti končnega produkta. Kromatografske prstne odtise smo ovrednotili z izborom skupnih kromatografskih vrhov, spremljanjem njihove višine, relativne višine v primerjavi s preostalimi skupnimi vrhovi ter spremljanjem celotne površine. Osredotočili smo se na analizo poteka bioprocesa, odstranjevanja DNK, bistrenja bioprocesne brozge, koncentriranja in diafiltracije ter preparativne kromatografije. Z vzpostavljeno metodo smo v vzorcih odvzetih tekom bioprocesa zaznali spremembe v sestavi dovedenega svežega gojišča, med encimskim odstranjevanjem DNK smo spremljali razgradnjo domnevnega vrha DNK in zaznali nove nečistoče, ki jih, kot smo opazili, popolnoma odstrani naslednji korak bistrenja. Metodo smo nato vpeljali v testiranje filtrirnih kaset za koncentriranje in diafiltracijo, kjer smo opazili znatne razlike v dinamiki odstranjevanja komponent vzorca. Analiza preparativnega kromatografskega koraka je pokazala, da se večino nečistoč odstrani prav med kromatografijo. Razvita metoda omogoča spremljanje bioprocesa s primerjavo relativnih sprememb posameznih vzorcev, vendar kvantifikacije celotne koncentracije lentivirusnih vektorjev ne omogoča.20232023-06-15 08:43:45Magistrsko delo/naloga146843sl