Protimikrobno delovanje in iskanje proteinskih tarč izbranih derivatov hidroksinaftojske kislinePerko, Zala (Avtor) Novinec, Marko (Mentor) antibiotikiodpornosthidroksinaftojska kislinaafinitetna kromatografijaHiter razvoj odpornosti bakterij proti klasičnim antibiotikom zaradi njihove pretirane in nepravilne uporabe je v veliko breme svetovnemu zdravstvenemu sistemu. V okviru diplomske naloge smo iskali protimikrobne učinkovine proti trem organizmom, ki pripadajo akronimu ESKAPE (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa in rod Enterobacter) in jih je svetovna zdravstvena organizacija uvrstila na seznam najbolj kritičnih patogenov. Zaradi napredujočih mehanizmov odpornosti ti povzročajo težko ozdravljive okužbe, zato je zanje ključno odkrivanje novih antibiotikov. S presejalnimi testi so predhodno identificirali dva derivata hidroksinaftojske kisline, 3-hidroksi-2-naftojsko kislino s protimikrobno aktivnostjo proti bakterijam S. aureus in Escherichia coli ter [(4-kloro-1-hidroksinaftalen-2-karbonil)amino]-2-metilpropanojsko kislino, ki je inhibirala rast S. aureus. V okviru diplomskega dela smo zato želeli preveriti protimikrobne lastnosti serije derivatov hidroksinaftojske kisline, ki so strukturno podobni izhodiščnim spojinam, in najbolj učinkovito med njimi uporabiti kot izhodišče za sintezo spojin z izboljšano protimikrobno aktivnostjo. Naš cilj je bil tudi identificirati proteinske tarče 1-hidroksi-2-naftojske kisline v topni frakciji lizata S. aureus z afinitetno kromatografijo na nosilcu z ustreznim derivatom te spojine. Naši rezultati so pokazali, da serija malih molekul selektivno inhibira rast grampozitivnih bakterij S. aureus in Bacillus thuringiensis, ne pa tudi rasti gramnegativnih bakterij E. coli in P. aeruginosa. Ugotovili smo, da ima [(1-hidroksinaftalen-2-karbonil)amino]-2-metilpropanojska kislina širši spekter delovanja kot njen klorirani derivat, saj inhibira rast obeh grampozitivnih vrst. Izmed komercialno dostopnih derivatov smo nadalje okarakterizirali dve spojini in najnižjo vrednost minimalne inhibitorne koncentracije 125 μg/mL določili za 7-bromo-3-hidroksi-2-naftojsko kislino proti B. thuringiensis. Pri sintezi liganda za afinitetno kromatografijo smo ugotovili, da uvedba alkilne skupine preko amidne vezi sicer izboljša protimikrobno aktivnost spojine, a hkrati močno zmanjša njeno topnost. Z uporabo afinitetne kromatografije smo ugotovili, da se na ligand specifično veže 25 kDa velik protein. Tega nam v okviru diplomskega dela ni uspelo identificirati, zato njegova identifikacija ostaja cilj nadaljnjih raziskav.20232023-05-11 10:10:00Diplomsko delo/naloga145735sl