Identifikacija molekul, ki inhibirajo aktivnost proteina LexA bakterij Escherichia coli ali Staphylococcus aureusHalas, Barbara (Avtor) Butala, Matej (Mentor) LexA represorodziv SOSOrbAgp8SPREscherichia coliStaphylococcus aureusVibrio choleraeBacillus thuringiensisOdziv SOS pri bakterijah se sproži ob poškodbah DNA in bakteriji omogoči, da ohrani integriteto lastnega genoma. Poglavitni regulator odziva je transkripcijski faktor LexA, ki z vezavo na promotorska področja prepreči prepis genov, katerih produkti so vključeni v popravilo DNA. Genom bakteriofaga GIL01 vključuje gen za protein gp7, ki se veže s proteinom LexA bakterije Bacillus thuringiensis. Protein gp7 zveča afiniteto LexA do specifičnih nukleotidnih zaporedij in inhibira s proteinom RecA sproženo inaktivacijo LexA. Posledično protein gp7 vpliva na aktivacijo odziva SOS, kar potencialno zavre prilagoditev bakterij na stresne razmere v okolju, tudi pridobitev odpornosti proti antibiotikom. Namen magistrskega dela je bil prepoznati molekule, ki vplivajo na delovanje represorja LexA, podobno kot protein gp7. V ta namen smo izolirali protein gp8 temperatnega bakteriofaga GIL01 bakterije B. thuringiensis in protein OrbA temperatnega bakteriofaga ICP1 bakterije Vibrio cholerae. Rezultati nakazujejo, da se izolirana rekombinantna proteina ne vežeta s proteinom LexA gostiteljske bakterije in ne vplivata na cepitev proteina LexA. V nadaljevanju smo analizirali vpliv nekaterih izbranih malih molekul, pridobljenih iz laboratorija prof. dr. Stanislava Gobca iz Fakultete za farmacijo, na aktivnost LexA. Z uporabo površinske plazmonske resonance smo dokazali, da se učinkovina 6-hidroksiflavon (U5) s šibko afiniteto veže s proteinom LexA bakterij Escherichia coli in Staphylococcus aureus ter inhibira vezavo LexA bakterije E. coli na DNA. S poskusi in vivo, v tekoči kulturi, smo dokazali, da dodatek U5 upočasni rast bakterijske kulture E. coli ΔacrB in deluje sinergistično z antibiotikom ciprofloksacin. Učinkovina U5 je šibko zavrla tudi rast seva E. coli RW542, ki ima okvarjen gen za LexA in okvarjen promotorski element gena sulA, zato predvidevamo, da U5 inhibitorno vpliva tudi na procese, ki niso del odziva SOS.[B. Halas]20232023-03-16 07:15:13Magistrsko delo/naloga144833sl