Vpliv izbitja gena FUBP3 in prekomernega izražanja gena fubp3 cebrice v človeških osteosarkomskih celicah na njihovo osteogeno diferenciacijoGojko, Klara (Avtor) Lovšin, Marija Nika (Mentor) FUBP3osteosarkomosteogena diferenciacijaqPCRAsociacijske študije v celotnem genomu (GWAS) so študije, ki obravnavajo številne pogoste genetske različice pri različnih osebkih, da bi ugotovili potencialne povezave z boleznimi. Ko so odkrite nove genetske povezave, lahko raziskovalci informacije uporabijo za razvoj boljših strategij za odkrivanje, zdravljenje in preprečevanje bolezni. GWAS študije so do zdaj podale veliko genskih lokusov povezanih s kostnimi boleznimi. Eden izmed odkritih lokusov je enonukleotidni polimorfizem rs7851693 v intronu gena za FUBP3, ki je povezan s tveganjem za zlome kosti oz. osteoporozo. Vloga proteina FUBP3 pri metabolizmu kosti še ni znana. V želji, da bi prispevali k raziskavam, smo poskušali določiti povezavo med izražanjem gena FUBP3 in kostnim rakom (osteosarkomom). V okviru magistrske naloge, smo najprej poskušali ugotoviti ali gen FUBP3 igra vlogo pri tvorbi kosti z uporabo tehnike popolnega izbitja gena med osteogeno diferenciacijo človeških osteosarkomskih celic (HOS, angl. human osteosarcoma cells ). Potek mineralizacije smo paralelno primerjali s potekom mineralizacije pri divjem tipu HOS celic. Z metodo barvanja Alizarin Red S in končnim kvantitativnim vrednotenjem smo ugotovili, da mineralizacija hitreje poteka pri divjem tipu, kar nakazuje, da gen FUBP3 ima določeno vlogo pri tvorbi kosti. Hitrejša mineralizacija je bila vidna tudi pod mikroskopom. Poleg tega smo naredili transfekcijo človeških HOS celic, z izbitim FUBP3 genom, s proteinom FUBP3 ribe zebrice (zfFUBP3) in praznim vektorjem (pCMV), da bi preverili ali povišano izražanje zfFUBP3 vpliva na osteogeno diferenciacijo. Rezultate smo tudi kvantitativno ovrednotili in ugotovili, da ima zfFUBP3 vpliv na tvorbo kosti in lahko sklepamo, da igra podobno vlogo kot človeški FUBP3. Poleg opisanih eksperimentov, smo z metodo PCR v realnem času (qPCR) kvantitativno izmerili še izražanje treh osteoblastnih genov – kolagena tipa I (COL1A1), osteokalcina (OC) in transkripcijskega faktora II (RUNX2). Rezultati magistrske naloge kažejo, da igra protein FUBP3 pomembno vlogo pri mineralizaciji osteosarkomske celične linije HOS.20232023-03-09 08:45:01Magistrsko delo/naloga144713sl