Opredelitev imunskega odziva po in vivo genskem elektroprenosu DNA-cepiva proti virusu SARS-CoV-2Gorše, Tim (Avtor) Kamenšek, Urška (Mentor) Kos, Špela (Komentor) SARS-CoV-2COVID-19DNA-cepivogenski elektroprenosplazmidiimunski odzivELISA testKonec decembra 2019 so iz Kitajskega mesta Vuhan poročali o izbruhu atipične pljučnice neznanega izvora. Analize genoma so pokazale, da gre za novega predstavnika koronavirusov, ki so ga poimenovali virus SARS-CoV-2. V manj kot enem letu od izbruha je virus zaradi visoke stopnje kužnosti povzročil pandemijo. Za njeno obvladovanje je bil razvoj učinkovitega cepiva nujno potreben. Do danes so bila odobrena 4 cepiva proti SARS-CoV-2, ki temeljijo na mRNA in adenovirusnih vektorjih. Veliko pozornosti je bilo usmerjene tudi v razvoj DNA-cepiv proti SARS-CoV-2. Učinkovitost DNA-cepiva je pogojena z metodo vnosa v tarčno tkivo. Ena od metod je elektroporacija, s katero povečamo permeabilnost celičnih membran in olajšamo vstop DNA v citoplazmo celic. Transfekcijo DNA v tarčno celico z elektroporacijo imenujemo genski elektroprenos. Glavni namen magistrske naloge je bil primerjati imunski odziv po genskem elektroprenosu DNA-cepiva proti virusu SARS-CoV-2 v mišico in kožo eksperimentalnih miši. Za genski elektroprenos smo pripravili mešanice plazmidnih DNA z geni, ki kodirajo za N in S proteina virusa SARS-CoV-2 in citokin IL-12. Imunski odziv smo vrednotili v vzorcih odvzetih na 13. in 28. dan po cepljenju. S komercialno dostopnimi testi ELISA smo določali prisotnost in koncentracije IFNγ (nespecifična imunost), ter titer anti-N in anti-S IgG protiteles (specifična humoralna imunost). S testom tetramerov smo določali delež CD8+N+ in CD8+S+ T celic (specifična celična imunost). Dokazali smo, da genski elektroprenos DNA-cepiva izzove tako nespecifično kot specifično imunost proti N in S proteinu. Ugotovili smo, da je aktivacija imunskega odziva intenzivnejša po genskem elektroprenosu v mišico in, da je v našem primeru N protein bolj imunogen od S proteina. Potrdili smo tudi, da je genski elektroprenos ustrezna metoda za vnašanje DNA-cepiva v tarčno tkivo.[T. Gorše]20232023-02-07 12:25:57Magistrsko delo/naloga144248sl