Primerjava analiznih metod za določanje koncentracij monoklonskih protiteles in fuzijskih proteinovModrijan, Tina (Avtor) Narat, Mojca (Mentor) Trdin, Ajda (Komentor) CHOCedexfuzijski proteinHPLCmonoklonsko protiteloOctetValitaTiterKoncentracijo monoklonskih protiteles (mAb) in fuzijskih proteinov lahko določamo z različnimi bioanalitskimi metodami in napravami. Med slednjimi afinitetna tekočinska kromatografija visoke ločljivosti (HPLC) velja za zlati standard. Ker je pridobivanje rezultatov s HPLC zelo zamudno, so se na trgu začele pojavljati številne alternativne visokozmogljive bioanalitske metode in naprave. Mednje lahko uvrstimo naprave družine Cedex, kjer določanje koncentracije produkta poteka z metodo imunske turbidimetrije, in Octet, ki temelji na interferometriji bioloških plasti, ter metodo ValitaTiter, s katero koncentracijo mAb in fuzijskih proteinov določamo na podlagi sprememb v polarizaciji svetlobe. Namen magistrske naloge je bil raziskati odstopanja med meritvami na HPLC in preostalimi visokozmogljivimi metodami oziroma napravami. Poleg tega smo želeli preveriti, ali proces ločevanja produktov od večjih nečistoč in zamrzovanje vzorcev vplivata na meritve naprav Cedex Bio HT. Za proučevanje potencialnega vpliva strukture molekul rekombinantnih proteinov na razlike med meritvami naprav, smo v eksperiment vključili štiri celične linije CHO, ki proizvajajo IgG1, IgG2, IgG4 in Fc-fuzijski protein. Tekom 14-dnevne produkcijske faze je potekalo dnevno vzorčenje bioprocesnih brozg. Ugotovili smo, da zamrzovanje vzorcev in postopek primarnega ločevanja nimata vplivata na meritve koncentracije produktov in da je odstopanje meritev na preučevanih visokozmogljivih napravah od meritev na HPLC predvsem odvisno od koncentracije produkta v vzorcu, umeritvenih krivulj ter od strukture rekombinantnega proteina. Med vsemi preučevanimi napravami oziroma metodami smo največje ujemanje s HPLC zabeležili pri analizatorju Octet QK.20222022-11-26 07:15:02Magistrsko delo/naloga142796sl