Analiza metilacijskih profilov DNA navadne konoplje (Cannabis sativa L.) gojene in vivo in in vitroTroha, Simon (Avtor) Murovec, Jana (Mentor) Cannabis sativametilacijaMSAPsubkultivacijaregeneracijain vivoin vitroMetoda, ki temelji na polimorfizmu metilacijsko specifičnih pomnoženih fragmentov (angl. methylation sensitive amplification polymorphism, MSAP) se uporablja za ugotavljanje metilacijskih sprememb pri organizmih. Sestoji iz encimske razgradnje DNA, selektivne pomnožitve fragmentov in elektroforeznega pregleda pomnožkov, kateri tvorijo vzorčno specifične metilacijske profile za medsebojno primerjavo. Metoda je uporabna za zagotavljanje kakovosti in vitro kultur, kjer je poleg genetskih sprememb potrebno spremljati spremembe tudi na epigenetskem nivoju. V magistrskem delu predstavljamo naš pristop izvedbe analize MSAP na rastlinskem materialu navadne konoplje (Cannabis sativa L.) gojene in vivo in in vitro. Primerjali smo metilacijske profile vzorcev C. sativa z namenom ugotavljanja epigenetske stabilnosti pri vegetativnem razmnoževanju z metodo zelenih potaknjencev v in vivo pogojih in pri različnih ciklih zaporednih subkultivacij na podlagi regeneracije stranskih brstov nodalnih izsečkov v in vitro pogojih. Pri analizi rastlin gojenih v in vivo pogojih smo zaznali statistično značilne razlike med posameznimi kloni. V drugem delu analize so rezultati pokazali statistično značilne razlike v metilacijskih profilih med vzorci donorskih rastlin gojenimi in vivo v rastlinjaku in prvo generacijo poganjkov in vitro, medtem ko med prvim in petim ciklom subkultivacije ni bilo zaznane statistično značilne razlike. Rezultati tako nakazujejo, da se razlike v fizikalnih pogojih rasti (in vivo vs. in vitro) in razvojne faze rastlin odražajo v metilacijskem profilu ter da vrsta C. sativa ohranja epigenetsko integriteto tekom mikropropagacije.20222022-10-15 07:15:18Magistrsko delo/naloga142009sl