Določevanje L- in D-aminokislinske sestave v bioloških vzorcihMeža, Kristjan (Avtor) Pompe, Matevž (Mentor) HPLC-MS/MSaminokislinekiralna ločbahidroliza z DClS-NIFEAminokisline imajo pomembno vlogo na področju medicine, farmacije, živilske in krmne industrije ter mnogih drugih. Razvoj rutinske in natančne analize tako L- kot D-enantiomerov je ključnega pomena za raziskave v medicini in farmaciji ter preverjanje kakovosti in avtentičnosti živil in krme. Analiza je težavna zaradi velike koncentracijske razlike enantiomerov v bioloških vzorcih, potrebe po kiralni ločbi ter dodatnega koraka hidrolize peptidov in proteinov. Pri pogojih hidrolize del aminokislin racemizira, kar vodi v netočno določitev razmerja enantiomerov. Možna rešitev racemizacije je uporaba devterirane klorovodikove kisline pri hidrolizi ter analiza s HPLC-MS/MS, kjer racemizirane aminokisline izločimo iz analize. Magistrsko delo zajema razvoj takšne metode. Pripravil sem diastereomerne derivate aminokislin s kiralnim reagentom S-NIFE. Na reverznofazni koloni sem ločil 35 aminokislin ter optimiziral pogoje masno-spektrometrične detekcije. Izvedel sem osnovno validacijo metode z določitvijo ponovljivosti, linearnosti, mej detekcije, točnosti ter izkoristkom ekstrakcije aminokislin po hidrolizi. Metodo sem preizkusil na vzorcu pripravka inzulina ter vzorcu proteinskega prehranskega dodatka. Preveril sem tudi stopnjo racemizacije pri uporabi devterirane ter nedevterirane klorovodikove kisline.20222022-09-28 13:15:02Magistrsko delo/naloga141337sl