Priprava od kalcija odvisnega transkripcijskega dejavnika s sintetičnimi dimerizacijskimi domenami na osnovi obvitih vijačnicKastelic, Alenka (Avtor) Benčina, Mojca (Mentor) Meško, Maja (Komentor) biotehnologijatranskripcijski dejavnikNFATobvite vijačniceNabor dobro okarakteriziranih in ortogonalnih transkripcijskih dejavnikov je v naravi omejen, zato smo z orodji sintezne biologije pripravili od kalcija odvisne umetne transkripcijske dejavnike s sintetičnimi domenami na osnovi obvitih vijačnic. Večdelni transkripcijski dejavnik smo sestavili iz treh delov: regulatorne domene proteina NFAT, DNA-vezavne domene efektorja TAL in aktivacijske domene VP64. Za medsebojno povezavo vseh treh delov smo uporabili pare obvitih vijačnic N7-N8, P3-P4 in P5A-P6A. Posamezen peptid, ki tvori obvito vijačnico, smo vezali na posamezno komponento sistema. Povezovanje prek parov obvitih vijačnic je omogočilo sestavljanje transkripcijskega dejavnika. Učinkovitost transkripcijskega dejavnika smo pokazali v sesalskih celicah HEK293T, v katere smo s transfekcijo vnesli pripravljene plazmidne konstrukte z deli transkripcijskega dejavnika in poročevalski plazmid z zapisom za kresničkino luciferazo. Transficirane celice smo stimulirali s kalcijevim ionoforom in aktivacijo našega sistema spremljali z merjenjem luminiscence. Ugotovili smo, da lahko konstitutivno aktivnost celic v odsotnosti stimulacije s kalcijevim ionoforom uspešno zmanjšamo z uporabo sidrnega peptida KRφ.20222022-09-15 07:17:29Magistrsko delo/naloga140443sl