Izražanje in uravnavanje kinaze FAM20C v kulturi skeletnomišičnih celicMilostnik, Marjeta (Avtor) Pirkmajer, Sergej (Mentor) skeletna mišicamioblastimišične cevčiceIL-6fosforilacijaFam20CSkeletna mišica je v fizioloških razmerah največje endokrino oziroma sekretorno tkivo v telesu. Poleg ostalih funkcij ima pomembno vlogo kot sekretorni organ, saj med telesno dejavnostjo izloča vrsto miokinov in drugi peptidov. Eden pomembnejših miokinov je interlevkin-6 (IL-6), ki je prvi miokin, za katerega so dokazali, da se sprosti v obtok med mišičnim krčenjem. IL-6 je vpleten v procese miogeneze in mišične hipertrofije. Med miogenezo pride do fuzije enojedrnih mioblastov, prekurzorjev miocitov, v večjerdne mišične cevčice, ki kasneje formirajo mišična vlakna. IL-6 deluje protivnetno tako, da inhibira izražanje TNF in IL-1 in spodbudi tvorbo klasičnih protivnetnih citokinov, kot sta IL-10 in IL-1ra. Je eden od pomembnih fosforiliranih proteinov, ki se izločajo. Človeški genom vsebuje zapise za kinaze iz družine Fam20, pod katere spadajo Fam20A, Fam20B in Fam20C. Vsaka od njih ima različno funkcijo. Kinaza Fam20C fosforilira več kot sto izločenih proteinov in se alosterično aktivira z interakcijo s psevdokinazo Fam20A. Substrati Fam20C sodelujejo pri veliko pomembnih bioloških procesih, kot so biomineralizacija, metabolizem fosfatov, adhezija in migracija celic ter delovanje srca. Fam20B fosforilira ksilozne ostanke in s tem nadzoruje sintezo proteoglikanov. Vse tri kinaze iz družine Fam20 imajo signalni peptid, ki jih usmeri v sekrecijo. Osnovni namen diplomskega dela je bil ugotoviti, kako se kinaza Fam20C in psevdokinaza Fam20A izražata v kulturi primarnih človeških skeletnomišičnih celic in podganjih skeletnomišičnih celic L6. Za analizo izražanja kinaze Fam20C in psevdokinaze Fam20A v kulturi podganjih in primarnih človeških skeletnomišičnih celic smo uporabili metodi verižno reakcijo s polimerazo v realnem času in prenos western. Pokazali smo, da se vse tri kinaze Fam20 izražajo v človeških in podganjih skeletnomišičnih celicah in da stopnja diferenciacije teh celic vpliva na izražanje Fam20C in Fam20A. Prav tako smo ugotovili, da je vzorec izražanja kinaze Fam20B drugačen od vzorcev izražanja za Fam20C in Fam20A.20222022-09-07 14:15:00Diplomsko delo/naloga139816sl