Priprava lentivirusnih vektorjev za regulacijo izražanja circRNA v celičnih linijahMatić, Iva (Avtor) Režen, Tadeja (Mentor) krožne RNArak jeterhsa_circ_0001861hsa_circ_0070039Krožne RNA uravnavajo številne procese v celicah in sodelujejo pri razvoju bolezni. Mnoge imajo spremenjeno izražanje v rakavih celicah in njihovo vlogo v razvoju raka, zlasti hepatocelularnega karcinoma (HCC), preučujemo v celičnih modelih. Namen diplomske naloge je bil priprava lentivirusnih vektorjev za prekomerno in utišano izražanje krožnih RNA. Kot kandidata za kloniranje vektorjev smo izbrali eksosomski krožni RNA hsa_circ_0001861 in hsa_circ_0070039, ki sta v raku jeter znižani. Utišanega izražanja nismo mogli določati, saj smo ugotovili, da se siRNA vežejo tudi na druge tarčne mRNA. Posledično bi bili zaradi prevelike nespecifičnosti utišani tudi drugi geni. Z metodami molekulskega kloniranja kot so PCR pomnoževanje, restrikcija, ligacija in transformacija, nam je uspelo vstaviti željeno zaporedje hsa_circ_0001861 v plazmidni vektor pRRcirc, kar smo tudi dokazali z določanjem nukleotidnega zaporedja z metodo po Sangerju. Ker imajo circRNA zelo kratko zaporedje, ki je specifično le za njih, je njihova detekcija, pomnoževanje in utišanje pogosto omejeno, kar onemogoča raziskave njihove funkcije v celičnih linijah.20222022-09-06 15:30:00Diplomsko delo/naloga139729sl