Načrtovanje inhibitornih domen za uravnavanje celične signalizacije CAR-TPleško, Ema (Avtor) Jerala, Roman (Mentor) Golob Urbanc, Anja (Komentor) CAR-Tcelična terapijaimunoterapija rakadanoprevirZAP-70CD45PD1Celična terapija s celicami CAR-T je povzročila izredno učinkovite ter v nekaterih primerih trajne klinične rezultate pri zdravljenju raka. Vseeno pa pri terapiji s celicami CAR-T obstajajo omejitve, vključno s smrtno nevarnim sindromom sproščanja citokinov in nevrotoksičnostjo. Za lajšanje simptomov neželenih učinkov se večinoma uporabljajo zdravilne učinkovine, a je za učinkovito in varno terapijo bolj smiselno uvesti mehanizme, ki omogočajo uravnavanje neželenih učinkov na ravni celične signalizacije CAR-T. V okviru magistrskega dela smo za uravnavanje celične signalizacije CAR-T s pristopi sintezne biologije načrtovali šest različnih inhibitornih domen, ki temeljijo na naravnih mehanizmih signalizacije celic T. Inhibitorne domene ter receptor CAR smo povezali s kemijsko inducibilnimi dimerizacijskimi domenami, tako da je signalizacija celic CAR-T inhibirana le ob dodatku eksogene majhne molekule. Za indukcijo heterodimerizacije smo uporabili danoprevir. Izražanje receptorjev CAR in funkcionalnost inhibitornih domen smo preučevali na celični liniji Jurkat s pretočno citometrijo in testom ELISA. Celice Jurkat smo uspešno elektroporirali s pripravljenimi genskimi konstrukti in potrdili izražanje CAR na površini celic. Vsi konstrukti so v odsotnosti danoprevirja sprožili celično aktivacijo. Ob dodatku danoprevirja, ki v nizkih koncentracijah ni citotoksičen, je popolno inhibicijo dosegel le konstrukt z inhibitorno domeno na osnovi fosfataze CD45. Pri inhibitornih domenah na osnovi ZAP-70 je prišlo do delne inhibicije, pri inhibitornih domenah na osnovi PD1 pa inhibicije ni bilo.20222022-08-27 07:16:11Magistrsko delo/naloga138993sl