Določevanje mesta vezave O-glikana na proteinuČubej, Katarina (Avtor) Pompe, Matevž (Mentor) O-glikanivezavno mestokromatografijaSPEO-glikozilacija ima zelo pomembno biološko funkcijo in je zato ključna pri raziskovanju bolezni in razvoju bioloških zdravil zanje. Obstajata dva načina za določitev vezavnega mesta O-glikanov na proteine. Prvi je sprostitev O-glikanov z encimskimi in kemičnimi metodami ter obdelava do stabilnejših in označenih derivatov pred analizo. Drugi je razkroj O-glikoproteina, kjer glikani ostanejo pritrjeni na O-glikopeptide, čemur sledi njihovo čiščenje, koncentriranje, separacija in analiza največkrat z različnimi načini fragmentacije v MS. V eksperimentalnem delu sem razvila metodo za separacijo mešanice fluorescenčno označenih O-glikanov s tekočinsko kromatografijo. Metodo na HILIC koloni sem zaradi visokih cen standardov najprej razvila na maltodekstrinih, maltozi in glukozi ter jo nato aplicirala na raztopino pripravljenega standarda. Velik presežek označevalca, ki je motil njihovo separacijo, sem odstranila s SPE ekstrakcijo. V nadaljevanju sem uporabila še kolono z mešanimi režimi, ki je po nekaj modifikacijah omogočila boljše rezultate. Pri validaciji sem preverila linearnost, mejo detekcije in kvantifikacije ter ponovljivost.20222022-07-08 12:35:00Diplomsko delo/naloga138064sl