Inhibicija signaliziranja MyD88 s kratkima različicama MyD88swt in MyD88sL265PMedved, Ines (Avtor) Manček Keber, Mateja (Mentor) Župunski, Vera (Komentor) MyD88MyD88L265PMyD88sNF-κBMyD88 (mieloidni diferenciacijski primarni odgovor 88) je najpomembnejša molekula pri naravni imunosti. Deluje kot adapter in povezuje receptorje (TLR, IL-1R), ki sprejemajo zunajcelične signale, s proteini, ki prenašajo signale znotraj celice. Sestavljen je iz domene smrti (DD) na N-koncu, osrednje intermediarne domene (IND) in Toll-interlevkin-1 receptorske domene (TIR) na C-koncu. Po aktivaciji receptorjev MyD88 skupaj z IRAK4 in IRAK1/2 tvori večje agregate midosome, ki so nujni za prenos signala do transkripcijskih faktorjev NF-κB in AP-1. MyD88L265P je oblika MyD88, ki ima v domeni TIR na mestu 265 zamenjan levcin s prolinom. Je konstitutivno aktiven, zato poveča aktivnost NF-κB, signalizacijo JAK-STAT3 in prepisovanje provnetnih citokinov. MyD88L265P je povezan tudi z nastankom bolezni, kot so B celični limfom, Waldenstroemova makroglobulinemija (WM) in kronična limfocitna levkemija. Stimulacija celic z bakterijskimi produkti ali provnetnimi citokini sproži tvorbo kratke oblike MyD88 z alternativnim izrezovanjem. Ob alternativnem izrezovanju se iz MyD88 popolnoma izreže ekson 2, ki vsebuje zapis za celotno domeno IND. Odsotnost domene IND onemogoči aktivacijo NF-κB, ne prepreči pa fosforilacje JNK in izražanje od AP-1 odvisnih genov. MyD88s torej deluje inhibitorno na aktivacijo NF-κB in ima terapevtski potencial pri zdravljenju bolezni, ki jih povzroči prekomerna aktivacija z MyD88 posredovanih poti. V magistrski nalogi smo pokazali, da kratki obliki MyD88swt in MyD88sL265P v celici reagirata in kolokalizirata z dolgo obliko MyD88. Kratki obliki MyD88swt in MyD88sL265P inhibirata aktivacijo NF-κB ob koekspresiji dolgih oblik MyD88wt in MyD88L265P. Opazili smo tudi inhibicijo MyD88 signalne poti po stimulaciji celic s citokinom IL-1β, ni pa prišlo do inhibicije signaliziranja s TNFα, ki je od MyD88 neodvisno. Močno povečano izražanje kratkih oblik MyD88s je obrnilo trend inhibicije v povečanje aktivacije. Ta pojav razlagamo s tem, da povečane količine MyD88swt in MyD88sL265P verjetno pripomorejo k tvorbi midosomskega kompleksa z endogenim MyD88, ki povzroči aktivacijo NF-κB. Čeprav kratke oblike MyD88s kot take zaradi tega niso primerne za zdravljenje, kaže, da bi alternativno izrezovanje eksona 2 z uporabo kratkih protismiselnih oligonukleotidov pri bolnikih z WM lahko imelo terapevtski potencial.20222022-04-21 11:10:00Magistrsko delo/naloga136267sl