Razširjenost okužbe z virusom hepatitisa E pri prašičih ob zakoluRaspor Lainšček, Petra (Avtor) Kirbiš, Andrej (Mentor) Toplak, Ivan (Komentor) bolezni prašičevvirologijazoonozehepatitis Efilogenijablatojetramesni izdelkiverižna reakcija s polimerazoencimsko vezani imunosorbentni testanaliza zaporedja DNARNAprašičiNaša raziskava sovpada s porastom zanimanja za »novo porajajočo se« bolezen virusa hepatitisa E (HEV) v svetu in prinaša nove izsledke o razširjenosti okužbe v slovenskih rejah prašičev. Ker gre za zoonozo, smo z raziskavo želeli ugotoviti, kakšno je stanje v slovenskih klavnicah in ali hepatitis E virus ogroža zdravje ljudi. Vzorčenje prašičev je potekalo v štirih klavnicah po Sloveniji med junijem in septembrom 2014. Vzorce blata, jeter in žolča smo odvzeli 811 klinično zdravim prašičem različnih starostnih kategorij. Ob vzorčenju v klavnici smo jemali tudi brise površin na klavni liniji, vzorčili mleto meso in pečenice. Z metodo RT-PCR v realnem času smo dokazovali prisotnost nukleinske kisline HEV v odvzetih vzorcih. Istim prašičem smo odvzeli tudi vzorec krvi in določali prisotnosti protiteles IgG proti HEV. Največ HEV pozitivnih živali smo ugotovili med 322 odojki, in sicer 17 %. Med 400 pitanci smo ugotovili en pozitiven vzorec jeter in en pozitiven vzorec žolča, kar je bistveno manj, kot smo pričakovali. Med 89 plemenskimi svinjami nismo ugotovili pozitivne živali. Med 63 brisi površin smo odkrili dva pozitivna vzorca. V vzorcih pečenic in mletega mesa prisotnosti HEV nismo ugotovili. Z genetsko tipizacijo 45 HEV pozitivnih vzorcev in filogenetsko primerjavo nukleotidnih zaporedij slovenskih sevov skupaj z zaporedji sevov HEV, ki so dostopni v podatkovni zbirki GenBank, smo ugotovili pojav velike genetske raznolikosti med vzorci ter prisotnost štirih različnih podtipov genotipa 3 (3a, 3b, 3e in 3f) HEV v Sloveniji. V izvedeni študiji genotipa 4 nismo ugotovili. V določanje nukleotidnega zaporedja smo vključili tudi pet humanih vzorcev, pozitivnih na prisotnost HEV. Zaradi premajhne količine virusne RNA v HEV pozitivnih humanih vzorcih nam pri nobenem ni uspelo določiti nukleotidnega zaporedja. Z dvema komercialnima encimskoimunskima testoma (ID Screen® Hepatitis E Indirect Multi-species proizvajalca IDvet in HEV-IgG ELISA porcine proizvajalca Axiom) smo pregledali vzorce krvi domačih prašičev na prisotnost protiteles IgG proti HEV. Pregledali smo 351 vzorcev, naključno izbranih iz vzorcev odvzetih na celotnem območju Slovenije v okviru rednega monitoringa kužnih bolezni pri prašičih v letih 2013 in 2014, ter 359 vzorcev, odvzetih v klavnici ob zakolu leta 2014. Primerjava rezultatov obeh testov je pokazala, da je encimskoimunski test proizvajalca Axiom ustreznejši za presejalna testiranja. Za razjasnitev 38 rezultatov, ki se pri vzorcih iz klavnice pri obeh encimskoimunskih testih niso ujemali, smo uporabili modificiran humani imunoblot test recomLine HEV IgG/IgM (Mikrogen diagnostik). Izvedena raziskava je prva tovrstna študija, ki dokazuje prisotnost HEV pri prašičih na klavni liniji v Sloveniji, prav tako je prva izvedena sistematična raziskava v tako širokem obsegu v Sloveniji. Rezultati raziskave prispevajo k boljšemu razumevanju stanja okužb prašičev s HEV ob vstopu na klavno linijo, in podajajo natančnejšo sliko o stanju prekuženosti prašičev v rejah. Glede na številčnost pregledanih vzorcev in razpršenost rej po državi, iz katerih so izhajali vzorčeni prašiči, lahko z gotovostjo trdimo, da rezultati podajajo natančen podatek o razširjenosti okužb s HEV med domačimi prašiči v Sloveniji.20222022-03-19 07:15:02Doktorsko delo/naloga135555sl