Karakterizacija bioluminiscenčne sonde za grancim BKlančnik, Bor (Avtor) Turk, Boris (Mentor) grancim BP. pastorisbioluminiscencasondaselektivnostGrancim B je serinska proteaza, ki se nahaja predvsem v citotoksičnih granulah imunskih celic, citotoksičnih limfocitih T in naravnih celicah ubijalkah. Pri imunskem odgovoru je ključni mediator sprožitve celične smrti v tarčnih celicah, vendar pa njegovo izražanje ni omejeno samo na efektorske celice imunskega sistema. V patoloških stanjih je njegovo izražanje povečano v številnih tkivih. Zaradi tega je primeren biološki označevalec, ki je uporaben za namene diagnostike in razumevanje poteka različnih bolezni. Bioluminiscenca je posebna zvrst kemiluminiscence, ki jo najdemo v različnih vrstah organizmov. Gre za encimsko reakcijo, kjer encim luciferaza pretvori substrat luciferin v produkt oksiluciferin. Pri tem se sprosti energija v obliki svetlobe. Zaradi zelo dobrega razmerja med šumom okolja in signalom reakcije je primerna za analitično spremljanje širokega spektra bioloških procesov in vitro ter in vivo. Modifikacije substrata bioluminiscenčne reakcije omogočajo razvoj sond za namene vizualizacije procesov tako in vitro, v celicah, kot tudi v laboratorijskih živalih. V magistrskem delu smo pripravili sev P. pastoris, ki izraža rekombinanten grancim B. Potrdili smo uspešno izražanje in izločanje aktivnega grancima B v gojišče. Rekombinanten grancim B smo primerjali s komercialnim rekombinantnim in nativnim grancimom B. Razvili smo in vitro bioluminiscenčno metodo merjenja aktivnosti za grancim B. S pripravljenim grancimom B smo dokazali selektivnost bioluminiscenčne sonde Z-AAD-NHLuc za grancim B v primerjavi z grancimi A, D, H, G in K.20212022-01-05 09:15:01Magistrsko delo/naloga134305sl