Uporaba perfuzije v predprodukcijski fazi za okrepitev bioprocesa z dohranjevanjemŠkufca, Jan (Avtor) Narat, Mojca (Mentor) Horvat, Jernej (Komentor) amonijakbioprocesglikanski profilglikozilacijalaktatmAbmonoklonska protitelesaokrepljen bioproces z dohranjevanjemoptimizacija bioprocesaperfuzijatiterOkrepljen bioproces z dohranjevanjem je bioproces, pri kateremu povečamo nacepitveno koncentracijo živih celic v produkcijski (N) fazi procesa, pri čemer je potrebno doseči dovolj visoko koncentracijo živih celic v predprodukcijski (N-1) fazi. Tukaj lahko to dosežemo na dva načina, in sicer z uporabo močno obogatenih rastnih medijev in medijev za dohranjevanje ali pa z uporabo perfuzije. V našem eksperimentu smo uporabili slednjo, pri čemer smo dobili dovolj visoko koncentracijo živih celic, da smo lahko produkcijske bioreaktorje nacepili s 5,0 in 10,0 x 106 živih celic/mL (10x in 20x več kot referenčni bioproces). Z vpeljavo predprodukcijske faze smo premaknili fazo rasti, ki je večinsko neprodukcijska, v predprodukcijsko. Hkrati smo se s perfuzijo znebili znatne količine laktata in amonijaka, ki sta stranska produkta metabolizma in povzročata inhibicijo rasti. Posledično smo v produkcijski fazi dosegli višje maksimalne koncentracije živih celic. Hkrati smo te dosegli med 5 in 7 dni prej. Poleg višje koncentracije nacepitve, nas je zanimal tudi učinek različnih začetnih koncentracij živih celic na produkcijski proces. Preučevali smo še vpliv različnih dodatkov v mediju za dohranjevanje na titer in kvaliteto produkta (mAb), in sicer dodane AK, Na2HPO4, galaktoza in Mn. Naš glavni cilj je bil, da dosežemo enak titer produkta z enako kvaliteto prej v primerjavi z referenčnim procesom ter tako skrajšamo produkcijsko fazo bioprocesa. Ugotovili smo, da to dosežemo med 5 in 6 dni prej, ter da je na koncu bioprocesa titer višji med 1,5x in 2,0x v primerjavi z referenčnim procesom. Pri kvaliteti smo se osredotočali na glikanske profile, katere smo ob različnih dnevih bioprocesa primerjali z referenčnim procesom na dan 14. Pri glikanskih profilih smo opazili različna odstopanja in trende sprememb.[J. Škufca]20212021-12-23 12:14:09Magistrsko delo/naloga134069sl