Zunajcelični polisaharidni sloj bakterij Campylobacter jejuniVertot, Manca (Avtor) Klančnik, Anja (Mentor) Sabotič, Jerica (Komentor) Campylobacter jejunizunajcelični polisaharidikapsulajedrska magnetna resonancaNMRizolacija polisaharidov kapsulePolisaharidi kapsule bakterij Campylobacter jejuni so pomembni virulentni dejavniki in lahko tvorijo komponente cepiv. Poznavanje popolne strukture in funkcije le-teh je izredno velikega pomena, zato smo v magistrski nalogi želeli vpeljati metodo izolacije polisaharidov kapsule in pridobljene polisaharide kapsule okarakterizirati z jedrsko magnetno resonanco (NMR). Za izolacijo polisaharidov kapsule smo uporabili encimsko metodo in metodo z vročim fenolom, in s slednjo smo pridobili večjo količino vzorca CPS. Kontaminacijo vzorcev s proteini in nukleinskimi kislinami smo preverili s spektrofotometrijo, agarozno elektroforezo in metodo NaDS-PAGE. Ugotovili smo, da polisaharidi kapsule, izolirani z metodo z vročim fenolom, vsebujejo večji delež nečistoč, kot polisaharidi kapsule, izolirani z encimsko metodo. Za detekcijo polisaharidov kapsule in ostalih glikokonjugantnih molekul smo izvedli metodo NaDS-PAGE z barvanjem s srebrom in perjodno kislino ter Schiff-ovim reagentom. Pri fenolnih vzorcih smo določili lipooligosaharide in polisaharide kapsule, medtem ko smo pri encimskih vzorcih opazili le lise pri majhni molekulski masi, ki predstavljajo lipooligosaharide. Pridobljene polisaharide smo okarakterizirali z metodo NMR, kjer smo pri encimskih vzorcih uspešno potrdili prisotnost osnovnih sladkornih komponent polisaharidov kapsule bakterij C. jejuni, ki so skladne z objavljenimi podatki. Prav tako, številni signalni na intervalu anomerne regije nakazujejo na prisotnost različnih oblik polisaharidov kapsule znotraj vzorca. Glede na rezultate lahko zaključimo, da smo optimizirali novo metodo izolacije polisaharidov kapsule bakterij C. jejuni.[M. Vertot]20212021-12-01 07:15:05Magistrsko delo/naloga133560sl