Lokalizacija egerolizinskega proteina v nitasti glivi Aspergillus nigerBarat, Simona (Avtor) Kraševec, Nada (Mentor) Sepčić, Kristina (Komentor) egeroliziniAspergillus nigerNigA1NigA2nekonvencionalna sekrecijaGenom nitaste glive Aspergillus niger vsebuje dva genska zapisa za proteina egerolizinske družine, nigerolizin A1 (NigA1) in nigerolizin A2 (NigA2). Za nigerolizina NigA1 in NigA2 se predvideva, da bi lahko sodelovala pri obrambi organizma. Do sedaj so ugotovili, da se nigerolizina izločata iz glive, saj sta bila prisotna v sekretomu. Zaradi odsotnosti signalnega peptida naj bi se izločala z nekonvencionalno sekrecijo. Z namenom ugotoviti lokacijo egerolizinov NigA1 in NigA2 na celični in/ali zunajcelični ravni smo uporabili različna javno dostopna spletna orodja za napovedovanje prisotnosti signalnih peptidov, transmembranskih domen, glikozilacijskih mest in morebitne celične in/ali zunajcelične lokacije. Z uporabo konfokalne mikroskopije, slikanjem živega micelija sevov glive Aspergillus niger in z uporabo fluorescenčnih sond in barvil smo ugotovili, da se NigA1-mCherry, NigA2-mCherry in NigA2-eYPF nahajajo pri mladih hifah, enakomerno razporejeni v citosolu celice, s staranjem hif pa se fluorescenca pojavi tudi znotraj vakuol. Prav tako sta oba egerolizina prisotna v sporah. Prisotnost NigA2 v citoplazmi hif smo potrdili še z imunooznačevanjem NigA2 s protitelesi. V primeru gojenja seva glive Aspergillus niger ob bakterijah Bacillus cereus je prišlo do morebitne interakcije med organizmoma in možnega izločanja NigA2-eYPF in NigA2-mCherry iz glive, kar kaže na morebitno vlogo NigA2 pri obrambnih mehanizmih glive. Delecija enega ali drugega gena nigerolizina bi lahko imela vpliv na zmanjšano kalitev spor glive.20212021-11-25 07:15:18Magistrsko delo/naloga133385sl