Vpliv majhnih organskih molekul iz hipertermofilne arheje Aeropyrum pernix K1 na procese agregacije inzulinaKamnik, Andreja (Avtor) Poklar Ulrih, Nataša (Mentor) Aeropyrum pernixmajhne organske molekuleagregacijainzulinemisijska fluorescenčna spektrometrijacirkularni dikroizemNamen naloge je bil iz hipertermofilne arheje Aeropyrum pernix K1 izolirati majhne organske molekule (termolite) ter preučiti njihov vpliv na agregacijo/fibrilacijo inzulina. Začeli smo z izolacijo termolitov z metodo HPLC ter nadaljevali s preučevanjem agregacije inzulinskih verig pri različnih pogojih. Iz arheje smo izolirali dve majhni organski molekuli, vendar ju nismo uspeli identificirati. Agregacijo inzulinskih verig smo spremljali z emisijsko fluorescenčno spektrometrijo z barvilom tioflavinom T (ThT). Veriga B je hitreje fibrilirala v nevtralnem kot v kislem območju, veriga A je tvorila fibrile samo pri pH 2,0. Fibrilacijo verige B smo potrdili s cirkularnim dikroizmom z določitvijo za fibrile značilne β-strukture. Proces fibrilacije sta najbolj zavirala manoza in N-acetilglukozamin, slabše je učinkovala glukoza, glicerol je preprečil nastanek fibril pri visoki koncentraciji, mio-inozitol ni imel vpliva. Z določitvijo sekundarne strukture polipeptidov ob dodatku molekul smo potrdili oziroma ovrgli nastanek fibril. Z nativno poliakrilamidno gelsko elektroforezo smo ugotovili, da nekatere molekule inzulinskih verig ostanejo po fibrilaciji v monomerni obliki in se ne vgradijo v fibrile. Glede na molekulsko sidranje se nobena izmed testiranih majhnih organskih molekul ne veže močno na verigo B. V nalogi smo uspešno postavili metodo za izolacijo termolitov, ugotovili katere molekule vplivajo na fibrilacijo inzulinskih verig, vendar nismo uspeli potrditi/ovreči delovne hipoteze glede vpliva termolitov na agregacijo inzulina.[A. Kamnik]20212021-10-15 07:15:04Magistrsko delo/naloga132167sl