Odziv človeških celic na listeriolizin O in njegove mutantePodgrajšek, Rebeka (Avtor) Podobnik, Marjetka (Mentor) Bedina Zavec, Apolonija (Komentor) celična biologijavezikulacijalisteriolizin O (Y406A)ATPreaktivne kisikove spojineListeriolizin O (LLO) je porotvorni protein bakterije Listeria monocytogenes. Njegovo delovanje je odvisno od pH. Na Kemijskem inštitutu so pripravili mutanta LLO Y406A, katerega aktivnost je pri sobni temperaturi še bolj odvisna od pH kot aktivnost divjega tipa (LLO wt). LLO Y406A je zato zanimiv za biotehnološke aplikacije. Namen naše raziskave je bil opredeliti učinek LLO wt in LLO Y406A na krvnih celicah pri fiziološki temperaturi (37 °C). Primerjali smo odziv različnih rakavih krvnih celic (K-562, Jurkat, Raji) z odzivom zdravih celic, izoliranih iz krvi. Stanje celic smo določali prek umiranja, sledenja izločenih zunajceličnih veziklov, nastajanja reaktivnih kisikovih spojin in količine ATP. Ugotovili smo, da je toksičnost LLO Y406A za krvne celice pri fiziološki vrednosti pH (7,4) zelo nizka. Tretiranje z LLO Y406A je povzročilo 20-odstotno umrljivost celic pri 300–7000-krat višjih koncentracijah kot tretiranje z LLO wt. Poleg tega smo ugotovili, da sta LLO wt in LLO Y406A pri fizioloških pogojih bolj toksična za rakave kot za zdrave krvne celice. Tretiranje z LLO wt je povzročilo 20-odstotno umrljivost zdravih celic pri 1,7–300-krat višjih koncentracijah kot pri rakavih celicah, LLO Y406A pa pri 3–30-krat višjih koncentracijah kot pri rakavih celicah. Z nižanjem vrednosti pH se aktivnost LLO Y406A še poveča. Pri vrednosti pH 6,5 je povzročil 20-odstotno umrljivost zdravih celic pri 4–40-krat višjih koncentracijah kot pri rakavih celicah. Povečano vezikulacijo kot odziv na LLO wt ali LLO Y406A smo zaznali že pri 10–100-krat nižji koncentraciji proteina kot umiranje celic. LLO wt in LLO Y406A nista povzročila povečanja reaktivnih kisikovih spojin, je pa LLO wt povzročil povišanje ATP, LLO Y406A pa ne. Pri višjih koncentracijah proteinov opazimo padec ATP.20212021-09-15 07:15:45Magistrsko delo/naloga130414sl