Spremljanje internalizacije fluorescentno označene α-D-manozilirane sonde v dendritične celice s superločljivostnim slikanjemPurić, Edvin (Avtor) Anderluh, Marko (Mentor) Mravljak, Janez (Komentor) Fluorescenčna mikroskopijaBODIPYDC-SIGNSTED mikroskopijaS superločljivostno mikroskopijo lahko opazujemo znotrajcelične procese pod magično mejo valovne dolžine vidne svetlobe 200 nm na nanometrskem nivoju. Za mikroskopijo z vzbujenim praznjenjem emisije, ki je ena izmed izvedbenih variant superločljivostne mikroskopije, so primerne le fluorescentne sonde, ki so kompatibilne z dodatnim laserskim žarkom, ki omogoča praznjenje emisije. Karakterizacija tovrstne sonde je bila osrednji cilj naših raziskav. V magistrski nalogi smo preučevali proces internalizacije fluorescentne sonde v različne tipe celic. Največ pozornosti smo namenili dendritičnim celicam in receptorju DC-SIGN (za dendritične celice specifični, intracelularno adhezijsko molekulo–3 vezoč neintegrin), ki igra izredno pomembno vlogo pri okužbah z mnogimi patogeni, kot je npr. okužba z virusom humane imunske pomanjkljivosti (HIV). Njegove glavne naloge so prepoznavanje patogenov oz. njihovih površinskih molekul in internalizacije ter prispevek k uničenju patogenov. Kljub vsem tem lastnostim pa lahko DC-SIGN s tem, ko zagotovi vstop patogenov v dendritične celice, tudi pospeši razvoj okužbe, kar je značilno ravno za virus HIV. DC-SIGN veže različne manozilirane proteine, oligomanozide in molekule, ki vsebujejo le eno enoto D-manoze. Preiskovali smo α-D-manozilirano fluorescentno sondo, ki je odporna na glikozidaze in tako zagotavlja stabilnost v celičnih testih. S fluorescenčno spektrofluorimetrijo smo ugotovili, da se njeni emisijski spektri ne spreminjajo v odvisnosti od pH okolice. Nadalje smo dokazali, da sonda prehaja v notranjost celic le, če te na svoji membrani izražajo DC-SIGN receptorje oz. druge lektine, ki vežejo manozo (angl. Mannose binding lectins, MBL). Dodana vrednost preiskovane sonde je primernost za mikroskopijo z vzbujenim praznjenjem emisije, saj je nabor sond, primernih za tovrstno mikroskopijo, precej omejen. Fluorescentna sonda predstavlja visoko učinkovito orodje za opazovanje bioloških procesov, kot je z lektini posredovan celični privzem v različnih bioloških okoljih.20212021-09-08 08:45:06Magistrsko delo/naloga129805sl