Določitev izražanja kanabinoidnih receptorjev na ravni informacijske RNA v celičnih linijah raka dojkeMlinar, Karmen (Avtor) Debeljak, Nataša (Mentor) kanabinoidni receptorjiRNA prepisirak dojkecelične linije raka dojkeKanabinoidni receptorji (CBR) so membranski receptorji povezani z G-proteini, ki vežejo kanabinoide eksogenega in endogenega izvora in so del endokanabinoidnega sistema. Ločimo dva tipa CBR: tip 1 (CB1, gen CNR1) s prevladujočim izražanjem v živčnih celicah in tip 2 (CB2, gen CNR2) z značilnim izražanjem v celicah imunskega sistema. CB1 receptor je v treh izooblikah: CB1, CB1a in CB1b, CB2 receptor pa v dveh izooblikah: CB2A in CB2B. Rak dojke je najpogostejša oblika malignosti pri ženskah, saj predstavlja kar 30 % vseh oblik raka pri ženskah. Na podlagi izražanja hormonskih receptorjev (HR) in receptorja za človeški epidermalni rastni faktor 2 (HER2) ločimo HR-pozitivni oz. luminalni, HER2-pozitivni in trojno negativni rak dojke. V celicah raka dojke je potrjeno izražanje CBR. Številne študije kažejo, da kanabinoidi vplivajo na lastnosti raka, znani pa so tako pozitivni kot negativni vplivi. Namen naše raziskave je bil pregledati obstoječe RNA prepise genov CNR1 in CNR2 ter določiti njuno izražanje na ravni RNA v celičnih linijah raka dojke. V prvem, bioinformatskem, delu naloge smo pregledali podatke o izražanju in obstoječe RNA prepise genov CNR1 in CNR2 v zbirkah Ensembl, NCBI in UniProt. Znotraj zbirke RefSeq smo našli 11 prepisov izooblike CB1, 1 izooblike CB1b in 1 izooblike CB2B, za izoobliki CB1a in CB2A pa nismo našli nobenega prepisa. V drugem, laboratorijskem, delu naloge smo določili raven izražanja CBR na izbranih celičnih linijah raka dojke (MCF7, T-47D, SK-BR-3, MDA-MB-231, MDA-MB-361), ki se razlikujejo v izražanju HR in HER2, ter dveh kontrolnih vzorcih (SH-SY5Y in možgansko tkivo). Iz vzorcev smo izolirali RNA in jo reverzno prepisali v cDNA. Izvedli smo kvantitativni PCR s testi TaqMan, ki so pokrivali največje število različnih prepisov preiskovanih genov CNR1 in CNR2, ter referenčna gena RPLP0 in HPRT1, izbranih na podlagi sorodnih študij. Iz dobljenih rezultatov smo z metodama za relativno kvantifikacijo določili raven izražanja preiskovanih genov. Nasprotno s svojimi pričakovanji v nobeni analizirani celični liniji raka dojke nismo zaznali izražanja gena CNR1. Izražanja gena CNR2 nismo mogli določiti, ker izbrani vzorci za pozitivno kontrolo niso bili ustrezni. Raziskavo bomo v prihodnje razširili na več celičnih linij raka dojke, preverili izražanje na ravni proteinov in zagotovili ustrezne pozitivne in negativne kontrole.20212021-09-07 19:00:00Diplomsko delo/naloga129757sl