Agregacijske študije proteina aneksin A11 ter njegovih mutantov D40G in Δ119Oblak, Iza (Avtor) Župunski, Vera (Mentor) aneksin A11amiotrofična lateralna sklerozaagregacija proteinaAmiotrofična lateralna skleroza (ALS) je neozdravljiva nevrodegenerativna bolezen, za katero je značilen postopen upad motoričnih funkcij. Najpogostejši genetski vzroki za dedno in sporadično obliko ALS je povečano število ponovitev v genu C9orf72 in drugačnosmiselne mutacije v genih SOD1, TARDBP ter FUS. Identificirali so nove drugačnosmiselne mutacije v genu ANXA11 in jih povezali z ALS. Gen ANXA11 zapisuje protein aneksin A11 (ANXA11), ki spada v večjo proteinsko družino aneksinov. Njegov C-konec je visoko ohranjen in sestavljen iz štirih aneksinskih ponovitev, medtem ko je njegov N-konec dolg, hidrofoben, intrinzično neurejen in sposoben vezave več interakcijskih partnerjev, med katerimi je najbolj poznan kalciklin. Najpogostejša mutacija ANXA11, povezana z ALS, je v evropski populaciji D40G, zaradi katere ANXA11 izgubi sposobnost vezave na kalciklin. Posledično pride do kopičenja ANXA11 v citoplazmi in njegove patološke agregacije. V tem magistrskem delu smo v celicah E. coli seva BL21 [DE3] pLysS izrazili 3 variante proteina ANXA11: ANXA11wt, ki predstavlja celoten zapis proteina, ANXA11D40G, ki predstavlja mutirano obliko proteina, ter ANXA11∆119, ki predstavlja za prvih 118 aminokislin skrajšano obliko proteina. Vse tri oblike smo izolirali z afinitetno kromatografijo preko heksahistidinske oznake in s kromatografijo z ločevanjem po velikosti. Nato smo izvedli agregacijske teste z metodo fluorescenčne spektroskopije, kjer smo kot fluorescenčno barvilo uporabili tioflavin T (ThT). Ugotovili smo, da je hitrost agregacije višja pri mutirani obliki ANXA11D40G glede na ANXA11wt in da je pri mutirani obliki ANXA11D40G potreben krajši čas za nastop agregacije. Dokazali smo pomembnost N-končne domene ANXA11 za njegovo agregacijo.20212021-09-01 16:30:00Magistrsko delo/naloga129290sl