<?xml version="1.0"?>
<rdf:RDF xmlns:rdf="http://www.w3.org/1999/02/22-rdf-syntax-ns#" xmlns:dc="http://purl.org/dc/elements/1.1/"><rdf:Description rdf:about="https://repozitorij.uni-lj.si/IzpisGradiva.php?id=129219"><dc:title>Opredelitev vpliva izbranih aminokislinskih zamenjav v holesterol-vezavni domeni perfringolizina O</dc:title><dc:creator>Filipović,	Marina	(Avtor)
	</dc:creator><dc:creator>Anderluh,	Gregor	(Mentor)
	</dc:creator><dc:creator>Lenarčič,	Brigita	(Komentor)
	</dc:creator><dc:subject>Od holesterola odvisni citolizin</dc:subject><dc:subject>perfringolizin O</dc:subject><dc:subject>lipidna membrana</dc:subject><dc:subject>holesterol</dc:subject><dc:description>Perfringolizin O (PFO) je pomemben virulenčni dejavnik bakterije Clostridium perfringens. Izloča se kot vodotopni monomer in se veže izključno na membrane, ki vsebujejo holesterol. Znano je, da se citolitični mehanizem PFO prične z vezavo njegove četrte domene (D4) na plazmalemo evkariontske celice, ter da začetna vezava poteka preko štirih zank na dnu te domene. Za prepoznavo in vezavo holesterola v membrani sta ključna dva aminokislinska ostanka in sicer T490-L491, ki sta v literaturi predlagana kot holesterol-vezavni motiv (angl. cholesterol recognition motif; CRM). Kljub temu točen mehanizem specifične prepoznave in začetne vezave membranskega holesterola še ni docela pojasnjen. Cilj raziskovalnega dela je bil ovrednotiti, kako izbrane aminokislinske zamenjave v zankah D4 proteina PFO vplivajo na njegovo vezavo na različne modelne membranske sisteme. Različice PFO ter posameznih D4 smo izrazili v bakterijskem ekspresijskem sistemu E. coli in jih uspešno očistili z Ni-NTA afinitetno kromatografijo ter kromatografijo z ločevanjem po velikosti. Vpliv mutacij na aktivnost izbranih različic PFO smo ovrednotili z merjenjem hemolitične aktivnosti, pri čemer smo aktivnost vsake različice primerjali z aktivnostjo divjega tipa. Ugotovili smo, da so različice z bolj hidrofobnimi aminokislinskimi ostanki v predlaganem CRM bolj hemolitično aktivne. Pri testih vezave na modelne membranske sisteme smo ugotovili, da se različice D4 z aminokislinskimi zamenjavami v predlaganem CRM vežejo na multilamelarne vezikle ter na orjaške unilamelarne vezikle s 50 mol. % holesterola. Dokazali smo, da se izbrane različice kljub zamenjavam aminokislin v take, ki imajo popolnoma drugačne biokemijske lastnosti, vežejo na holesterol-vsebujoče membrane.</dc:description><dc:date>2021</dc:date><dc:date>2021-08-30 13:05:06</dc:date><dc:type>Magistrsko delo/naloga</dc:type><dc:identifier>129219</dc:identifier><dc:language>sl</dc:language></rdf:Description></rdf:RDF>