Razvoj prehransko sprejemljivih selekcijskih sistemov za bakterijo Lactococcus lactisŠtravs, Petra (Avtor) Berlec, Aleš (Mentor) Lactococcus lactisgen lacFbarnazabarstarsistem toksin-antitoksinprehransko sprejemljivi selekcijski sistemiSistemi za selekcijo bakterij, transformiranih z vektorskimi konstrukti, pogosto temeljijo na odpornosti proti antibiotikom. Zaradi nevarnosti prenosa genov za odpornost proti antibiotikom na druge bakterije ter splošno neželene uporabe antibiotikov, je potreba po uporabi varnejših, prehransko sprejemljivih selekcijskih sistemov velika. V tem magistrskem delu smo skušali vzpostaviti selekcijski sistem za bakterije Lactococcus lactis, ki temelji na sposobnosti presnove laktoze. Pripravili smo vektorski konstrukt pNZ8148_cat_lacF, iz katerega je z restrikcijskim encimom SalI mogoče enostavno izrezati obstoječi selekcijski označevalec, ki omogoča odpornost proti kloramfenikolu. V primerjavi z že obstoječim plazmidom za selekcijo na laktozi, pNZ8149, gen lacF na plazmidu pNZ8148_cat_lacF vsebuje lastni promotor in terminator transkripcije. Pri bakterijah L. lactis smo proučili tudi možnost uporabe potencialnega selekcijskega sistema toksin antitoksin, ki bi temeljil na ribonukleazi barnazi in njenem inhibitorju barstaru. Za ta namen smo pripravili vektorski konstrukt pNZDual_Ldh_Bar_Pnis_Bstar. Preverili smo, ali barnaza inhibira rast celic L. lactis in ali sočasno izražanje njenega inhibitorja barstara izniči ta vpliv, kar smo tudi potrdili. Gre za prvi poskus heterologne ekspresije barnaze in proteina barstar v vrsti L. lactis.[P. Štravs]20212021-08-27 08:52:35Magistrsko delo/naloga129136sl