Kromatografija bakteriofagov in bakteriofagne DNA na kromatografskih nosilcih polyHIPEVrh, Staš (Avtor) Podgornik, Aleš (Mentor) bakteriofagifagna DNAionsko izmenjevalna kromatografijapolyHIPEZaradi svoje ozke vrstne specifičnosti bakteriofagi predstavljajo možno alternativo uveljavljenemu zdravljenju bakterijskih okužb pri ljudeh z antibiotiki. Bakteriofagi se že uporabljajo v agroživilstvu za nadzor patogenov. Poleg zdravljenja bakterijskih okužb in nadzora patogenov se razvijajo tudi nove aplikacije bakteriofagov, kot so na primer dostavni sistemi za dostavo zdravil in genov. Zaradi širokega nabora aplikacij v prihodnosti pričakujemo povečevanje potrebe po proizvodnji bakteriofagov. Zaključni procesi proizvodnje bakteriofagov običajno vključujejo metode s slabo učinkovitostjo in težavnim prenosom v večje merilo. Razvoj monolitnih kromatografskih nosilcev je omogočil uvedbo kromatografije v analitiko in zaključne procese proizvodnje bakteriofagov. PolyHIPE predstavljajo nov razred monolitnih kromatografskih nosilcev, ki pa še niso bili preizkušeni za ločbo bakteriofagov. Namen magistrskega dela je bil preveriti uporabnost različno funkcionaliziranih polyHIPE kromatografskih kolon za ločbo fagov in njihove DNA ter optimizirati kromatografsko ločbo. Z uporabo polyHIPE kromatografske kolone, funkcionalizirane s QA, smo iz bakterijskega lizata uspeli ločiti bakteriofaga T4 in T7 ter njuno genomsko DNA. Povratni tlak se tudi po nekaj zaporednih ciklih vezave in elucije ni bistveno povečal. Z optimizirano kromatografsko metodo smo analizirali sestavo bakterijskega lizata in spremljali njeno spreminjanje med procesom gojenja fagov. Kromatografska metoda se je izkazala za primerno za medprocesno spremljanje gojenja fagov. Ugotovili smo, da predobdelava bakterijskega lizata z obarjanjem s PEG ali povečanje koncentracije Na+ v nalagalni raztopini lahko izboljšata ločljivost kromatografske metode.[S. Vrh]20212021-08-27 08:15:18Magistrsko delo/naloga129113sl