Delecija genske skupine za biosintezo oksitetraciklina v bakteriji Streptomyces rimosus z metodo homologne rekombinacijeRebek, Matej (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) aktinomiceteStreptomyces rimosustetraciklinidelecija GBGhomologna rekombinacijaBakterija Streptomyces rimosus je ena izmed najbolje preučenih industrijskih streptomicet, ki proizvaja antibiotik oksitetraciklin (OTC). Zaradi visokega donosa OTC je sev S. rimosus atraktiven gostitelj za heterologno produkcijo naravnih učinkovin poliketidnega izvora. Namen te magistrske naloge je bil pridobiti sev S. rimosus z delecijo genske gruče za biosintezo oksitetraciklina. Delecijo smo izvedli z metodo homologne rekombinacije. Konstruirali smo temperaturno občutljiv plazmid, ki vsebuje vse elemente sistema homologne rekombinacije. Uporabili smo homologne sekvence različnih dolžin, ki so nalegale na začetek in konec otc genske gruče. Kolonije z ustrezno delecijo smo iskali z metodo subkultivacij in s precepljanjem kolonij na agarske plošče z in brez dodanega selekcijskega markerja (eritromicin). Pri pridobljenih mutantah, ki niso proizvajale OTC, smo delecijo potrdili na genetski ravni s PCR in s sekvenciranjem ter na metabolni ravni s tankoplastno kromatografijo (TLC) in s tekočinsko kromatografijo (LC).[M. Rebek]20212021-05-26 07:15:10Magistrsko delo/naloga127209sl