Analiza lastnosti proteina gp7 bakteriofaga GIL01Zupančič, Špela (Avtor) Butala, Matej (Mentor) protein gp7signalne sekvenceBacillus thuringiensisinhibicija odziva SOSProteina RecA in LexA sta ključna proteina tako imenovanega odziva SOS, ki omogoča ohranitev integritete in strukture genoma bakterij, ki rastejo v stresnih, genotoksičnih razmerah. V tem odzivu pa se lahko sproži tudi prehod nekaterih bakteriofagov iz lizogenega v litičen cikel. Bakteriofag GIL01, ki okužuje bakterijo Bacillus thuringiensis, za vzpostavitev lizogenega cikla izkorišča gostiteljev protein LexA. Protein LexA se veže na tarčna mesta v promotorski regiji P1 bakteriofaga GIL01, to vezavo pa dodatno stabilizira protein gp7 tega bakteriofaga. Kompleks LexA-gp7 prepreči bakteriofagu prehod v litični cikel. V magistrski nalogi smo preverili, ali lahko protein gp7 prosto prehaja iz gojišča v bakterijo. Z afinitetno kromatografijo smo očistili protein gp7 in analogni protein DdrR iz bakterije Acinetobacter baumannii. Nadalje smo očistili protein gp7, katerega smo sklopili s signalnim zaporedjem YKKSNNPFSD, ki naj bi omogočilo vnos proteinov v bakterijo Bacillus subtilis. Za odstranitev afinitetne značke na amino-terminalnem koncu proteinov smo uporabili encim enterokinaza. Zasnovali smo test prehoda proteinov gp7 v Bacillus thuringiensis serovar israelensis, ki temelji na analizi promotorske aktivnosti P1 z β-galaktozidaznimi testi. Dokazali smo, da je protein gp7 stabilen v izrabljenem gojišču bakterije B. thuringiensis. Rezultati nakazujejo, da gp7 ali gp7 s signalno sekvenco ne prehajata prosto v bakterijo.20212021-02-25 07:15:23Magistrsko delo/naloga124895sl