Vpliv različnih formulacij TiO2 nanodelcev na preživetje, diferenciacijo in nevrodegenerativne spremembe pri človeških nevralnih celicah in vitroKoren, Tina (Avtor) Pavlin, Mojca (Mentor) Lojk, Jasna (Komentor) TiO2nanodelciSH-SY5YnevrodegeneracijaROSdiferenciacijapreživetjeNamen magistrskega dela je bil določiti ali izbrani TiO2 nanodelci (ND) (ANATAZ, P25, FG) vplivajo na celice - preživetje, diferenciacijo, nastanek reaktivnih kisikovih zvrsti (ROS), proteine, ki so povezani z nevrodegenerativnimi spremembami, na modelu človeških nevralnih celic SH-SY5Y. Po vzpostavitvi in optimizaciji protokola diferenciacije celic SH-SY5Y, smo diferenciacijo potrdili z določitvijo sprememb v izražanju markerjev diferenciacije (MAP-2, Lamin B, GAP-43) s SDS-PAGE ter prenosom western, kjer smo opazili statistično značilno povečanje vseh diferenciacijskih markerjev v primerjavi z nediferenciranimi celicami. Z uporabo fluorescentnih barvil Hoechst 33342 in PI ter fluorescenčne mikroskopije nismo opazili statistično značilnega vpliva TiO2 ND koncentracij 2, 10 in 25 µg/mL na preživetje diferenciranih celic SH-SY5Y po njihovi 1-dnevni in 5-dnevni izpostavljenosti ND. Prav tako s pomočjo SDS-PAGE ter prenosa western nismo opazili statistično značilnega vpliva TiO2 ND koncentracije 10 in 25 µg/mL na potek diferenciacije celic SH-SY5Y. S pomočjo spektrofluorometrične meritve smo opazili statistično značilno povečanje ROS pri najvišji dodani koncentraciji ND 25 μg/mL, tako pri 5-dnevni izpostavljenosti P25 in ANATAZ ND ter 1-dnevni izpostavljenosti P25 in FG ND. Z uporabo SDS-PAGE ter prenosa western smo opazili, da prihaja do manjše razlike v količini amiloidnega prekurzorskega proteina (APP) ter beta-amiloida (Aβ) po 5-dnevni in 1-dnevni izpostavljenosti celic ND koncentracije 25 µg/mL, ne moremo pa identificirati nastalih fragmentov APP, zato tudi ne moremo določiti pomena teh sprememb. V sklopu magistrskega dela smo uspešno vzpostavili protokol diferenciacije celic SH-SY5Y, pokazali vpliv izbranih TiO2 ND na nastanek ROS ter na količino znotrajceličnih proteinov APP in Aβ. Nismo pa opazili vpliva izbranih ND na preživetje ter diferenciacijo celic SH-SY5Y.20202020-10-30 07:15:04Magistrsko delo/naloga121792sl