Uravnavanje izražanja interlevkina 6 preko prostaglandinskega receptorja EP4Kranjc, Tilen (Avtor) Mlinarič-Raščan, Irena (Mentor) limfociti B-celični receptor prostaglandiniinterlevkin 6 citometrični citokinski test receptorji EP4 polimerazaVezava antigena na imunoglobulinski receptor BCR izzove aktivacijo in proliferacijo pri zrelih limfocitih B ter apoptozo pri nezrelih limfocitih B. Stimulacija BCR aktivira signalne poti v celici, ki vodijo do transkripcijskega reprogramiranja. Poveča se tudi izraţanje gena Ptger4, ki kodira prostaglandinski receptor EP4, na katerega se veţe naravni ligand prostaglandin E2. Prostaglandini so ţe dlje časa znani kot modulatorji imunskega odziva. Vezava prostaglandina E2 na receptor EP4 povzroči aktivacijo od cikličnega AMP odvisnih in neodvisnih signalnih poti, ki vodijo v modulacijo BCR induciranega fenotipskega odziva limfocitov B. Aktivacija BCR inducira izraţanje gena za interlevkin 6, ki ima v svoji promotorski regiji vezavno mesto za transkripcijski faktor CREB. Namen diplomskega dela je pojasniti vlogo receptorja EP4 pri modulaciji BCR induciranega izraţanja interlevkina 6. Pri eksperimentalnem delu smo se posluţili farmakološkega pristopa. Celično linijo WEHI 231 smo stimulirali z različnimi agonisti, antagonisti in inhibitorji signalnih poti. Vpliv stimulacije receptorja EP4 na BCR inducirano izraţanje gena za IL-6 smo spremljali z metodo veriţne reakcije s polimerazo v realnem času, izločanje IL-6 v celični medij pa s citometričnim citokinskim testom. Z encimsko imunskim testom za cAMP smo ugotavljali z receptorjem EP4 posredovano nastajanje cikličnega AMP v WEHI 231 celicah. Vlogo EP4/cAMP odvisnih signalnih poti pri modulaciji BCR induciranega izraţanja IL-6 smo ugotavljali z uporabo izbranih inhibitorjev encima adenilat ciklaze in protein kinaze A. V zadnjem delu diplomske naloge smo še določili vpliv IL-6 na proliferacijo WEHI 231 celične linije z metodo MTS. Ugotovili smo, da stimulacija WEHI 231 celic s PGE2 poviša z BCR inducirano izraţanje gena za IL-6. Z uporabo specifičnega agonista in antagonista receptorja EP4 smo dokazali, da so učinki PGE2 posredovani preko EP4 podtipa receptorja. Ker stimulacija receptorja EP4 sama po sebi nima vpliva na izraţanje gena za IL-6, sklepamo, da stimulacija receptorja EP4 modulira BCR inducirane signalne poti. Stimulacija receptorja EP4 je povzročila dvig intracelularne koncentracije cAMP. Z inhibicijo encima adenilat ciklaze in encima protein kinaze A smo dosegli popolno inhibicijo z receptorjem EP4 posredovane modulacije BCR induciranega izraţanja in izločanja IL-6. S tem smo dokazali, da poteka modulacija BCR induciranega izraţanja in izločanja IL-6 v nezrelih limfocitih B preko cAMP/PKA odvisne signalne poti, ki najverjetneje vodi v povečano aktivacijo transkripcijskega faktorja CREB. Izločeni IL-6 deluje na celično linijo WEHI 231 stimulatorno, saj se je proliferacija celic v prisotnosti rekombinantnega IL-6 povečala. Kljub povečanemu izraţanju gena za IL-6 ob hkratni stimulaciji receptorja EP4 in BCR, pa stimulacija obeh receptorjev vodi v zniţano izraţanje gena za receptor za IL-6, kar nakazuje obstoj negativne povratne zanke.[T. Kranjc]20102020-10-05 10:28:10Diplomsko delo121335sl