Optimizacija metode kemoporacije za vnos plazmidov v bakterijske celiceOmerzel, Maša (Avtor) Štrukelj, Borut (Mentor) kompetentne celice kemoporacija metode gelska elektroforeza biološke metode plazmidiDanes si raziskav v molekularni biologiji in genetiki ne moremo predstavljati brez tehnik rekombinantne DNA tehnologije. Ključni korak v tem procesu predstavlja vnos genskega materiala v celice. V ta namen so bile razvite številne tehnike vnosa, kljub temu pa iskanje novih, učinkovitih metod za transformacijo določene vrste bakterijskih celic predstavlja velik izziv. V diplomskem delu smo se osredotočili na optimizacijo metode kemoporacije. Kompetentne celice E. coli smo pripravili po postopku s kalcijevim kloridom. Kot možne kemoporante smo preizkusili osem spojin, za katere smo domnevali da imajo ugodne lastnosti za kemoporacijo (reverzibilno vplivajo na permeabilizacijo celične membrane). Le-te smo preizkusili v treh različnih koncentracijah, da bi dobili optimalno uspešnost transformacije (TE). Kot referenčno metodo transformacije kompetentnih celic smo uporabili metodo toplotnega šoka. Poleg optimizacije koncentracije kemoporantov smo skušali ugotoviti, kako se z velikostjo in količino plazmida, ki je na voljo, spreminja uspešnost transformacije. Metodo kemoporacije smo skušali uporabiti tudi na L. lactis. S pomočjo pretočne citometrije pa smo skušali razložiti mehanizem kemoporacije. Kemoporacija E. coli z najboljšimi kemoporanti je dajala visoke vrednosti TE, medtem ko bakterij L. lactis s to metodo nismo uspeli transformirati. Natančen mehanizem kemoporacije še vedno ostaja neznan.[M. Bošnjak]20112020-09-30 12:06:50Diplomsko delo121157sl