Validacija neinvazivnega presejalnega testa za odkrivanje Downovega sindroma iz polne krvi nosečnicRedenšek Trampuž, Sara (Avtor) Štrukelj, Borut (Mentor) neinvaziven presejalni test DNA različna metilacija imunoprecipitacija neinvazivna diagnostika validacija testovDownov sindrom je ena izmed najpogostejših prirojenih genetskih motenj in je hkrati najpogostejši vzrok za mentalno zaostalost. Tveganje za Downov sindrom ugotavljamo z neinvazivnimi testi. Če je ugotovljeno tveganje visoko, izvedemo še invaziven test, s katerim potrdimo oz. ovržemo prisotnost Downovega sindroma. Invazivni testi lahko povzročijo različne zaplete, med drugim tudi splav. Slednje je že vrsto let gonilna sila za razvoj novih neinvazivnih testov, s katerimi bi se lahko dokopali do plodovega dednega materiala. Z našo raziskavo smo želeli validirati neinvaziven presejalni test za ugotavljanje prisotnosti oz. odsotnosti Downovega sindroma na podlagi vzorca periferne krvi nosečnice in ga preizkusiti na slovenski populaciji nosečnic. V krvi nosečnice se nahaja fetalna DNA, ki je na kromosomu 21 na določenih regijah hipermetilirana v primerjavi z materino. Z metodo imunoprecipitacije metilirane DNA smo fetalne tarčne regije ločili od materinih. Razliko v številu kopij tarčnih regij med trisomijo in normalnim vzorcem smo zaznali z verižno reakcijo s polimerazo v realnem času. Rezultate smo nato analizirali z določenim algoritmom.Testirali smo 26 vzorcev krvi, od katerih je bila pri enem z amniocentezo dokazana trisomija 21. V našem laboratoriju smo uspeli z nekoliko prilagojenim protokolom pravilno določiti trinajst vzorcev, med katerimi je bil tudi vzorec z Downovim sindromom. Tekom študije smo naleteli na nekaj težav z eno izmed tarčnih regij, zato smo se odločili, da te regije v izračunu ne bomo upoštevali, s čimer smo dobili precej bolj prepričljive in jasne rezultate. Menimo, da ima validirana metoda potencial, da bi se lahko nekoč uporabljala tudi v klinični praksi, vendar jo je potrebno testirati na večjem vzorcu nosečnic v standardiziranih pogojih. Test lahko izvedemo relativno zgodaj v nosečnosti, je enostaven, poceni in hiter.[S. Redenšek]20152020-09-29 13:01:48Magistrsko delo/naloga121059sl