Priprava, izolacija in karakterizacija rekombinantnega proteina erilizina BMravinec, Martina (Avtor) Sepčić, Kristina (Mentor) Skočaj, Matej (Komentor) egeroliziniproteini z domeno MACPFporotvorni kompleksceramid fosfoetanolaminProtein erilizin B (EryB) uvrščamo med proteine z domeno MACPF (Pfam PF01823). Sintetizira ga goba Pleurotus eryngii, njegova biološka vloga pa je še neznana. Njegov homolog je protein pleurotolizin B (PlyB), ki pa ga sintetizira goba Pleurotus ostreatus. Gobe iz tega rodu prav tako sintetizirajo proteine egerolizine, ki s proteini z domeno MACPF, tvorijo porotvorne komplekse. Dokazano je, da imajo egerolizini specifično afiniteto za vezavo na membrane, sestavljene iz kombinacij sfingomielina (SM) in holesterola ali pa ceramid fosfoetanolamina (CPE) in holesterola, proteini z domeno MACPF pa to vezavo ojačajo in skupaj z egerolizini tvorijo dvokomponentne transmembranske pore. V magistrski nalogi smo EryB sintetizirali v bakteriji Escerichia coli, ga uspešno izolirali in v kombinaciji z egerolizini iz gliv rodu Pleurotus (erilizin A, ostreolizin A6, pleurotolizin A2) preverili njegovo aktivnost z uporabo površinske plazmonske resonance, testom sproščanja kalceina in testom hemolize. Ugotovili smo, da EryB, podobno kot njegov homolog PlyB, tvori dvokomponentne komplekse z egerolizini in da so le ti porotvorni. Kompleksi egerolizin/EryB so manj uspešni pri tvorbi por, v primerjavi s kompleksi egerolizin/PlyB, za kar so najverjetneje odgovorni različni aminokislinski ostanki proteinov z domeno MACPF, ki prepoznajo egerolizine.20202020-09-23 07:15:59Magistrsko delo/naloga120561sl