Vpliv proteina poliribonukleotid nukleotidiltransferaza bakterije Aggregatibacter actinomycetemcomitans na rast kvasovke Saccharomyces cerevisiaePinter, Matic (Avtor) Butala, Matej (Mentor) Petrovič, Uroš (Komentor) ParodontitisAggregatibacter actinomycetemcomitansprotein PNPazazunajcelični membranski veziklikvasovkeParodontalne bolezni so skupina najbolj razširjenih obolenj ustne votline. Ena izmed invazivnejših oblik parodontalnih bolezni je agresivni parodontitis. Pri pacientih z agresivnim parodontitisom so določili izrazito povišano število bakterije Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. a.), ki s svojimi viruletnimi faktorji negativno vpliva na gostiteljsko tkivo. Z bioinformatskim orodji so nedavno ustvarili seznam proteinov seva A. a. D7S, ki naj bi interagirali z molekulami mRNA v človeških celicah. Iz pripravljenega seznama smo izbrali 6 proteinov (PNPaza, DnaK, F0F1 ATP sintaza, RPS1, TadG in ThrRS) in preverili njihov vpliv na rast kvasovke Saccharomyces cerevisiae, v katere smo predhodno transformirali pripravljene plazmidne kostrukte z genom za izbrani protein pod kontrolo galaktoznega promotorja. Ob prisotnosti galaktoze kot edinega vira sladkorja v gojišču, smo tako sprožili izražanje izbranih genov v kvasovki. Ugotovili smo, da sprožitev gena za PNPazo ali za različico tega proteina, ki ima na amino terminalnem koncu pripeto značko 3x-FLAG, inhibira rast kvasovke. Uspešno smo prepoznali tudi ključni aminokislinski ostanek proteina PNPaza, saj ob spremembi aminoksiline na mestu 133 varianta proteina ne deluje inhibitorno na rast kvasovke. Pripravili smo tudi plazmidni konstrukt za s 3x-FLAG tagom označenim proteinom PNPaza pod kontrolo nativnega promotorja bakterije A. a. Verjamemo, da bodo slednji konstrukt in v nalogi pridobljeni rezultati omogočili nadaljnje raziskave, ki bodo preučile vpliv proteina PNPaza na humane celice.20202020-09-18 07:17:10Magistrsko delo/naloga120296sl